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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠转化问题
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠转化问题

用DH5α转化质粒，铺到氨苄的板上，挑单菌落，在含有氨苄的液体培养，长得挺好，就是提质粒没东西。为什么没有质粒，还能在有氨苄的板上和液体培养基中生长呢？
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1楼 2012-06-17 10:46:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
氨苄有问题没？
DH5α直接涂看看长不？
质粒的拷贝数？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2012-06-17 12:51:50
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果菌种没有问题，操作没有问题，估计就是质粒的问题，有的质粒拷贝数不高
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4楼2012-06-17 13:08:53
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普通回帖

happywyh

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 氨苄有没有失效
2 提质粒过程有没有问题
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2楼2012-06-17 11:15:41
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是培养时间太长了，卫星菌落长出来了。DH5a的卫星菌落长的很快，稍微培养时间长点就出来了。
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5楼2012-06-17 14:12:07
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
氨苄有木有问题？
质粒抽提过程有没有问题？
挑菌是不是挑到了卫星菌落？
是否有氨苄抗性菌污染？
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6楼2012-06-17 17:10:02
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502549180

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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7楼2012-06-17 17:42:15
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 很热心哦 2012-06-18 13:50:08
根据你的说法
我觉得你应该考虑一下几个方面：
第一，你转接到液体培养基小摇过夜菌液有没有生长？
第二，你的氨苄有没有失效？
第三，提质粒时稍微加大一下样品体积
第四，你用试剂盒还是自己手抽呢？？手抽的话 你要看看你的solution有没有污染或者变坏？
你的问题说明的还是偏少，多尝试一下
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8楼2012-06-18 08:59:35
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jasonwyb123 at 2012-06-18 08:59:35
根据你的说法
我觉得你应该考虑一下几个方面：
第一，你转接到液体培养基小摇过夜菌液有没有生长？
第二，你的氨苄有没有失效？
第三，提质粒时稍微加大一下样品体积
第四，你用试剂盒还是自己手抽呢？？手抽的 ...

氨苄是新配的，用了5ml菌液试剂盒提的质粒，今天打算再做一次转化试试。
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9楼2012-06-18 10:05:31
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陈帅印

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jqq1985 at 2012-06-17 14:12:07
是不是培养时间太长了，卫星菌落长出来了。DH5a的卫星菌落长的很快，稍微培养时间长点就出来了。

如果是卫星菌落在液体含有氨苄的培养基能生长吗？
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10楼2012-06-18 10:12:08
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