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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 摸索色谱条件，从何下手更快呀？
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] 摸索色谱条件，从何下手更快呀？

最近在摸一个复方制剂含测条件，想多测几个组分，但其中只有一个组分峰比较高，其他组分好像都降解没多少了，目前锁定5个组分，但不知道如何入手，我该怎么办呀！
首先，我用最简单的超声处理样品，然后就HPLC进样，先用甲醇-0.1%磷酸进了一针，效果不好，就改用乙腈-0.1%磷酸，效果相对还行，需要再调整！
现在的问题是，我应该盯着乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序进行修改，直到好为止，不行再考虑其他的。还是拿其他的流动相试试，改变下酸的种类、浓度，或考虑用甲醇-乙腈的混合溶液？
是把色谱条件优化好了，再考虑样品的处理方法吗？可是样品成分复杂，色谱峰有些乱，想纯化一下！

关键是，乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序怎么通过色谱图来判定做出调整，我一改变比例，有些峰倒是分开了，但之前分开的峰又不行啦，是否有方法或规律呢？
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去做自己想做的
1楼 2012-06-15 00:07:49
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:03
没有捷径。建议还是选择磷酸吧，不挥发，较乙酸重现性高。
但浓度，比例，组分之类的，建议再优化一下。分离多组分，使用缓冲盐调整流动相pH或许比较好一点。
个人看法。
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守候在风中的宁静。
2楼2012-06-15 08:54:19
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t892893235

木虫 (著名写手)

范德姆特大对勾

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:10
色谱摸索的过程远不如我们想象中的简单。首先我们得确定样品是适合正向色谱还是反向色谱（根据被分析物的极性来看，极性强的物质适合用正向来分析；反之用反向色谱法）；其次需要选柱子（对于方向色谱来说，先查下分子量小于2000的话用C18柱，反之用C8柱。还有对被分析物的极性来讲，C8柱适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18反之。）再者就是流动相的优化了，一般（反向）用水和乙腈的效果比较好，不过通常还需要再优化梯度什么的。楼主可以自己试着摸索一下。
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3楼2012-06-15 09:00:26
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18913305197
4楼2012-06-15 12:29:57
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MJF628

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:15
可以考虑使用实验设计方法及软件辅助，方法采用响应面分析，软件有色谱模拟软件。
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静水深流
5楼2012-06-15 20:14:00
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星
是吗 我一点点摸索，啥时候才能得到最优的条件啊！
实验设计是个好办法，但我更不懂哦，只做过正交，还未研究过响应面。
色谱模拟软件？ 竟然有这种软件，好使吗，是不是首先需要前期累积许多数据，才能模拟
我去找找看，感谢您的建议！有想法
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去做自己想做的
6楼2012-06-18 23:51:16
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星
引用回帖:
5楼: Originally posted by MJF628 at 2012-06-15 20:14:00
可以考虑使用实验设计方法及软件辅助，方法采用响应面分析，软件有色谱模拟软件。

是吗 我一点点摸索，啥时候才能得到最优的条件啊！
实验设计是个好办法，但我更不懂哦，只做过正交，还未研究过响应面。
色谱模拟软件？ 竟然有这种软件，好使吗，是不是首先需要前期累积许多数据，才能模拟
我去找找看，感谢您的建议！有想法
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去做自己想做的
7楼2012-06-18 23:52:04
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pdl0911

铜虫 (正式写手)
好奇什么东西会降解？？？ 我以前用液相制备的时候也有东西降解了，用甲醇水保存去坐质谱都没东西了。。。。
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我要努力~
8楼2012-06-20 22:16:54
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星
引用回帖:
8楼: Originally posted by pdl0911 at 2012-06-20 22:16:54
好奇什么东西会降解？？？ 我以前用液相制备的时候也有东西降解了，用甲醇水保存去坐质谱都没东西了。。。。

我做的是复方制剂，药材提取制剂后，许多药材里原有的组分就没有，可能热不稳定或见光已分解的物质吧！
我太不太清楚 呵呵
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去做自己想做的
9楼2012-06-20 23:12:23
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SDZYYDXscl09

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yilishanshan at 2012-06-20 23:12:23
我做的是复方制剂，药材提取制剂后，许多药材里原有的组分就没有，可能热不稳定或见光已分解的物质吧！
我太不太清楚 呵呵...

楼主，你要从你提取制剂的方法入手，你可以用你现在提取制剂的方法分别提取一下各个药材，看看组分会不会消失，做一个小试验就行，在试管内就能完成。至于你说的热不稳定和见光分解，我觉得可能性不大，超声提取的话，温度不会太高，没什么问题。至于条件摸索，方法如下：首先，你的检测器最好是DAD检测器，这样可以进行全波长扫描，利于找到这五个组分共有的吸收波长，然后，先设一个大梯度：比如10%-100%的乙腈进样一次，跑30min,就是一分钟三个梯度，能分开的地方梯度就不用调，比如前十五分钟的峰达到基线分离，十五到二十分钟的峰没分开，那就相当于55%-70%洗脱太快，那就可以拉长时间，现在是5分钟，你可以让他跑10min,或者到40%的乙腈的时候让他维持一段时间比如15分钟，也有利于后面的峰达到基线分离希望能帮到你！
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我知道的让你知道，你知道的我要知道！
10楼2013-06-10 00:00:11
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