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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 摸索色谱条件，从何下手更快呀？
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] 摸索色谱条件，从何下手更快呀？

最近在摸一个复方制剂含测条件，想多测几个组分，但其中只有一个组分峰比较高，其他组分好像都降解没多少了，目前锁定5个组分，但不知道如何入手，我该怎么办呀！
首先，我用最简单的超声处理样品，然后就HPLC进样，先用甲醇-0.1%磷酸进了一针，效果不好，就改用乙腈-0.1%磷酸，效果相对还行，需要再调整！
现在的问题是，我应该盯着乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序进行修改，直到好为止，不行再考虑其他的。还是拿其他的流动相试试，改变下酸的种类、浓度，或考虑用甲醇-乙腈的混合溶液？
是把色谱条件优化好了，再考虑样品的处理方法吗？可是样品成分复杂，色谱峰有些乱，想纯化一下！

关键是，乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序怎么通过色谱图来判定做出调整，我一改变比例，有些峰倒是分开了，但之前分开的峰又不行啦，是否有方法或规律呢？
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去做自己想做的
1楼 2012-06-15 00:07:49
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t892893235

木虫 (著名写手)

范德姆特大对勾

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:10
色谱摸索的过程远不如我们想象中的简单。首先我们得确定样品是适合正向色谱还是反向色谱（根据被分析物的极性来看，极性强的物质适合用正向来分析；反之用反向色谱法）；其次需要选柱子（对于方向色谱来说，先查下分子量小于2000的话用C18柱，反之用C8柱。还有对被分析物的极性来讲，C8柱适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18反之。）再者就是流动相的优化了，一般（反向）用水和乙腈的效果比较好，不过通常还需要再优化梯度什么的。楼主可以自己试着摸索一下。
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3楼2012-06-15 09:00:26
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:03
没有捷径。建议还是选择磷酸吧，不挥发，较乙酸重现性高。
但浓度，比例，组分之类的，建议再优化一下。分离多组分，使用缓冲盐调整流动相pH或许比较好一点。
个人看法。
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守候在风中的宁静。
2楼2012-06-15 08:54:19
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MJF628

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:15
可以考虑使用实验设计方法及软件辅助，方法采用响应面分析，软件有色谱模拟软件。
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静水深流
5楼2012-06-15 20:14:00
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星
是吗 我一点点摸索，啥时候才能得到最优的条件啊！
实验设计是个好办法，但我更不懂哦，只做过正交，还未研究过响应面。
色谱模拟软件？ 竟然有这种软件，好使吗，是不是首先需要前期累积许多数据，才能模拟
我去找找看，感谢您的建议！有想法
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去做自己想做的
6楼2012-06-18 23:51:16
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