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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] 摸索色谱条件,从何下手更快呀?

最近在摸一个复方制剂含测条件,想多测几个组分,但其中只有一个组分峰比较高,其他组分好像都降解没多少了,目前锁定5个组分,但不知道如何入手,我该怎么办呀!
首先,我用最简单的超声处理样品,然后就HPLC进样,先用甲醇-0.1%磷酸进了一针,效果不好,就改用乙腈-0.1%磷酸,效果相对还行,需要再调整!
现在的问题是,我应该盯着乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序进行修改,直到好为止,不行再考虑其他的。还是拿其他的流动相试试,改变下酸的种类、浓度,或考虑用甲醇-乙腈的混合溶液?
是把色谱条件优化好了,再考虑样品的处理方法吗?可是样品成分复杂,色谱峰有些乱,想纯化一下!

关键是,乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱程序怎么通过色谱图来判定做出调整,我一改变比例,有些峰倒是分开了,但之前分开的峰又不行啦,是否有方法或规律呢?

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去做自己想做的
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pdl0911

铜虫 (正式写手)

好奇什么东西会降解??? 我以前用液相制备的时候也有东西降解了,用甲醇水保存去坐质谱都没东西了。。。。
我要努力~
8楼2012-06-20 22:16:54
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:03
没有捷径。建议还是选择磷酸吧,不挥发,较乙酸重现性高。
但浓度,比例,组分之类的,建议再优化一下。分离多组分,使用缓冲盐调整流动相pH或许比较好一点。
个人看法。
守候在风中的宁静。
2楼2012-06-15 08:54:19
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t892893235

木虫 (著名写手)

范德姆特大对勾

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:10
色谱摸索的过程远不如我们想象中的简单。首先我们得确定样品是适合正向色谱还是反向色谱(根据被分析物的极性来看,极性强的物质适合用正向来分析;反之用反向色谱法);其次需要选柱子(对于方向色谱来说,先查下分子量小于2000的话用C18柱,反之用C8柱。还有对被分析物的极性来讲,C8柱适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质,C18反之。)再者就是流动相的优化了,一般(反向)用水和乙腈的效果比较好,不过通常还需要再优化梯度什么的。楼主可以自己试着摸索一下。
3楼2012-06-15 09:00:26
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MJF628

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:15
可以考虑使用实验设计方法及软件辅助,方法采用响应面分析,软件有色谱模拟软件。
静水深流
5楼2012-06-15 20:14:00
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