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lilirong2009铜虫 (小有名气)
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细菌RNA提取
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| 最近在提取大肠杆菌和化脓链球菌的RNA，取对数期3mL菌液于1.5mL离心后用DEPC水清洗一次，加Trizol之前用10mg/mL的溶菌酶处理10min，离心弃上清后加入1mLTrizol，激烈振荡15 s，室温静置5 min； 每管加入 0.2 mL 的氯仿剧烈振荡 15 s后室温静置 3 min；4℃, 12000 g, 离心 10 min；吸取上层400微升水相，转入另一新的 1.5 mL 离心管， 加入等体积的异丙醇颠倒混匀；4℃，静置 1 h；4℃，12000 g，离心 10 min。但是我离心后没有看到任何沉淀，我还是按步骤操作，最后加10微升的DEPC水，然后跑了个琼脂糖电泳，看到降解的5s条带，为什么没有沉淀呢？是溶菌酶没有处理好还是静置的时间不够？后来我把菌液加大到8mL，做了加酶和不加酶处理，加异丙醇静置1h离心，只有加酶处理的化脓链球菌有明显沉淀，其它管仍没有沉淀。实在困惑啊。 |
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