【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 热心积极的虫虫，灰常欢迎来到分子版 2012-06-09 13:40:20
蝈蝈1988: 金币+10, ★有帮助 2012-06-14 16:32:22
蝈蝈1988: 金币+60, ★★★很有帮助, 暂时搞定了。。。。。。。嘿嘿嘿。。。。。。。。。。。乐啊。。。。。。。。。 2012-07-16 09:22:26
1. PCR上游：
UPstream-Forward：ACAAACATTGACGCTAAAGCC
UPstream-Reverse：ATACGGGCTGTCAAACTATTGAGTTTTCTTCCTCCGAGAGC
UPstream 产物序列（218bp）： ACAAACATTGACGCTAAAGCCAAGATTGCTATGTTACGCATCAAATAATTCCTCGCTTTCTCGAACAGTACTATTCGATGTCAGTGCGGATCACTATAACCCTGCTGCTGCAAACTAGCGTCAGAGCATGTAAAAGAACGTAAAGTTATGGAATAGCAAAGTTTGTTATCGTATTTTGCTCTCGGAGGAAGAAAACTCAATAGTTTGACAGCCCGTAT
2. PCR下游：
LOWstream-Forward：GCTCTCGGAGGAAGAAAACTCAATAGTTTGACAGCCCGTAT
LOWstream-Reverse：CAAAACAGTTCATTAGCAGGGTA
LOWstream 产物序列(215bp)
GCTCTCGGAGGAAGAAAACTCAATAGTTTGACAGCCCGTATTTTTGCGATTTTCTGGCTTACACTGGCGCTCGTCCTGATGGTGGCCTTGATGGCACCAAAACTGGATTCACGGCAATTGACACCGCTGTTGGACAGTGAATATCAACAGGGCATCATACTCGCGAAACAGATAGAAAAAGAGTTAACCCGCTACCCTGCTAATGAACTGTTTTG
3. 两个PCR片段分别回收，再合并作为模板，再用：
UPstream-Forward: ACAAACATTGACGCTAAAGCC
LOWstream-Reverse: CAAAACAGTTCATTAGCAGGGTA
两个引物扩增。即可以得到你要的除去目的基因的上下游片段。
UP+LOW stream产物序列（392 bp）：
ACAAACATTGACGCTAAAGCCAAGATTGCTATGTTACGCATCAAATAATTCCTCGCTTTCTCGAACAGTACTATTCGATGTCAGTGCGGATCACTATAACCCTGCTGCTGCAAACTAGCGTCAGAGCATGTAAAAGAACGTAAAGTTATGGAATAGCAAAGTTTGTTATCGTATTTTGCTCTCGGAGGAAGAAAACTCAATAGTTTGACAGCCCGTATTTTTGCGATTTTCTGGCTTACACTGGCGCTCGTCCTGATGGTGGCCTTGATGGCACCAAAACTGGATTCACGGCAATTGACACCGCTGTTGGACAGTGAATATCAACAGGGCATCATACTCGCGAAACAGATAGAAAAAGAGTTAACCCGCTACCCTGCTAATGAACTGTTTTG
PCR产物（392bp）连入载体，测序后即可。中间去除了目标基因！ |
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