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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 简并引物 PCR扩增疑问

我设计了一对简并引物,以cDNA第一链为模板进行扩增。当退火温度是45度时,扩增出一条模糊不清的片段,大小将近1000bp,是目的片段,如图1所示。为了使条带清晰,改变退火温度,设定梯度为40度、45度、50度、55度、60度,均未扩增出目的条带,如图2所示。出现这种结果不知什么原因。请大家帮个忙,感激不尽!!!

图1 退火温度为45度



图2 梯度退火温度
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as1688816

木虫 (正式写手)

简并引物不好扩,要求你的cDNA质量高才行,如果扩的跑胶不亮,浓度不够ta克隆也做不出来,更何况条带时有时无,建议还是做race靠谱些。

发自小木虫Android客户端
6楼2017-02-25 15:36:39
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查看全部 6 个回答

hexf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
含羞草liu: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-14 15:01:16
第一个图中的第二条泳道的1K片段是不是从MARKER那里漂过来的?溢出来的?
2楼2012-06-12 20:48:04
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

图1的条带可能是受污染后出现的
好好学习
3楼2012-06-13 23:14:29
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hexf

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
但是如果真是溢出来的话,条带应该是象MARKER一样多条条带。看来我上面的解释也不成立。除非是非常巧合。只能解释是污染了或都是点错样了。要不就是你的梯度PCR没做好?继续尝试吧
4楼2012-06-24 22:22:46
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