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简并引物 PCR扩增疑问
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我设计了一对简并引物，以cDNA第一链为模板进行扩增。当退火温度是45度时，扩增出一条模糊不清的片段，大小将近1000bp，是目的片段，如图1所示。为了使条带清晰，改变退火温度，设定梯度为40度、45度、50度、55度、60度，均未扩增出目的条带，如图2所示。出现这种结果不知什么原因。请大家帮个忙，感激不尽！！！ 图1 退火温度为45度  图2 梯度退火温度 |
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