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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 简并引物 PCR扩增疑问
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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 简并引物 PCR扩增疑问

我设计了一对简并引物，以cDNA第一链为模板进行扩增。当退火温度是45度时，扩增出一条模糊不清的片段，大小将近1000bp，是目的片段，如图1所示。为了使条带清晰，改变退火温度，设定梯度为40度、45度、50度、55度、60度，均未扩增出目的条带，如图2所示。出现这种结果不知什么原因。请大家帮个忙，感激不尽！！！

图1 退火温度为45度



图2 梯度退火温度
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hexf

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努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-06-08 10:58:27
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hexf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
含羞草liu: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-14 15:01:16
第一个图中的第二条泳道的1K片段是不是从MARKER那里漂过来的？溢出来的？
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2楼2012-06-12 20:48:04
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

图１的条带可能是受污染后出现的
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好好学习
3楼2012-06-13 23:14:29
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hexf

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
但是如果真是溢出来的话，条带应该是象MARKER一样多条条带。看来我上面的解释也不成立。除非是非常巧合。只能解释是污染了或都是点错样了。要不就是你的梯度PCR没做好？继续尝试吧
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4楼2012-06-24 22:22:46
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天蓝鱼儿会飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hexf at 2012-06-12 20:48:04
第一个图中的第二条泳道的1K片段是不是从MARKER那里漂过来的？溢出来的？

还会有这种情况吗 别逗了啊
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海上巨鳄正在登陆！
5楼2017-02-25 15:28:50
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as1688816

木虫 (正式写手)
简并引物不好扩，要求你的cDNA质量高才行，如果扩的跑胶不亮，浓度不够ta克隆也做不出来，更何况条带时有时无，建议还是做race靠谱些。

发自小木虫Android客户端
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6楼2017-02-25 15:36:39
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