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mc2840261

新虫 (初入文坛)

[求助] 纤维素酶高产菌株筛选时的透明圈问题

小弟在做纤维素酶高产菌株的诱变选育,采用羧甲基纤维素钠刚果红培养基,但是透明圈很不明显,基本上就比菌落大个1mm……想求助下各位大侠,到底是什么原因,有没有改进的方法,能让透明圈变的大点~
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其实不幸福,其实还爱她,只是无法说出口
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)


zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖交流 2012-06-07 23:01:44
哥们,俺研究生就做和你一样的课题。
首先,在配置羧甲基纤维素培养基时,将羧甲基纤维素钠加入到培养基中然后加热至八十摄氏度,一直搅拌,直至羧甲基纤维素钠溶解为止。
其次,千万别在培养基中加刚果红,我也做过的,水解圈效果不明显,刚果红抑制微生物生长。
应该是在未加刚果红的培养基上培养微生物,待微生物菌落长大后,添加1mg/ml的刚果红溶液浸泡半个小时后,用NaCl溶液浸泡后,用蒸馏水冲洗,透明全就出来了
祝福你
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4楼2012-06-07 17:45:50
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mc2840261 at 2012-06-07 21:15:46
首先很感谢你!但是你说的我做过了!染色法染不出来……所以才去用直接加到培养基里面的方法,我培养的是真菌,菌长呢,但是染色后不出现透明圈,刚果红的浓度一样,而且我染了1个小时呢,不过用Nacl后没有用水洗, ...

我当时也是培养的真菌(霉菌),首先你确定你培养的真菌能分解羧甲基纤维素钠吗,分解能力很强吗?如果培养的真菌不能分解羧甲基纤维素钠的话,你后面做的再好也不会出现透明圈的,其次你的培养基呢,一定要保证羧甲基纤维素钠完全溶于培养基中才行。
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10楼2012-06-08 09:32:53
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

mc2840261: 回帖置顶 2012-06-12 10:47:33
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠(CMC)培养基(参考察氏培养基,用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖,通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度,并经反复试验后,最终确定羧甲基纤维素钠添加量为0.8%,并在其中添加适量氯霉素以抑制细菌和放线菌的生长,其余配方不变;CMC不易溶于水,在配制该培养基时,加入CMC后,需在80℃的水浴锅中加热2h并不断搅拌使CMC充分溶解。)
CMC  0.8% ,NaNO3  0.3%, KCl  0.05%, K2HPO4  0.1%,FeSO4  0.001%,
MgSO4•7H2O  0.05%, 琼脂 2%,氯霉素 0.005%,pH 6.0 ,115℃灭菌15min
刚果红实验步骤待所点菌种在CMC平板上长出可见菌落后,往平板里加入适量1mg/ml的刚果红溶液,染色1h后,弃去染色液,并同时用蒸馏水清洗,最后加入适量1mol/L的NaCl溶液,脱色1小时,观察水解圈直径与菌落直径的大小。
附件中试我当时做的图片

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  • 2012-06-08 09:40:36, 1.08 M
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11楼2012-06-08 09:40:39
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by mc2840261 at 2012-06-10 21:55:44
还要麻烦下你了,我用你的方法了,还是染不出来,菌落有,但就是没有透明圈啊,能帮我分析下是什么原因么?拜谢了……...

你好!我感觉应该是菌种的问题了吧,因为能在该平板上长的也不一定就能产生水解圈,我当时好多菌种都能在该平板上生长,但也不产生水解圈,从自然界筛选产纤维素酶的菌种很困难的,如果你是为了做论文,我建议你两条路同时走,一条就是从自然界筛选,接着你现在的往下做;另一条就是购买现有的菌种,然后采用诱变等方法,提高其产酶能力,也是一条路子。单纯依靠从自然界筛选风险还是比较大的
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18楼2012-06-12 11:20:30
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