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mc2840261

新虫 (初入文坛)

[求助] 纤维素酶高产菌株筛选时的透明圈问题

小弟在做纤维素酶高产菌株的诱变选育,采用羧甲基纤维素钠刚果红培养基,但是透明圈很不明显,基本上就比菌落大个1mm……想求助下各位大侠,到底是什么原因,有没有改进的方法,能让透明圈变的大点~
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其实不幸福,其实还爱她,只是无法说出口
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

mc2840261: 回帖置顶 2012-06-12 10:47:33
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠(CMC)培养基(参考察氏培养基,用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖,通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度,并经反复试验后,最终确定羧甲基纤维素钠添加量为0.8%,并在其中添加适量氯霉素以抑制细菌和放线菌的生长,其余配方不变;CMC不易溶于水,在配制该培养基时,加入CMC后,需在80℃的水浴锅中加热2h并不断搅拌使CMC充分溶解。)
CMC  0.8% ,NaNO3  0.3%, KCl  0.05%, K2HPO4  0.1%,FeSO4  0.001%,
MgSO4•7H2O  0.05%, 琼脂 2%,氯霉素 0.005%,pH 6.0 ,115℃灭菌15min
刚果红实验步骤待所点菌种在CMC平板上长出可见菌落后,往平板里加入适量1mg/ml的刚果红溶液,染色1h后,弃去染色液,并同时用蒸馏水清洗,最后加入适量1mol/L的NaCl溶液,脱色1小时,观察水解圈直径与菌落直径的大小。
附件中试我当时做的图片

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  • 2012-06-08 09:40:36, 1.08 M
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11楼2012-06-08 09:40:39
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north_coco887

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖交流 2012-06-07 23:01:35
好像是利用纤维素酶扩散的原理,产酶量高,扩散的范围就大,会不会和琼脂浓度有关系呢?以前做过一点儿,后来不用了。不是降解CMC-Na的都能产纤维素酶。
2楼2012-06-07 14:09:46
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mc2840261

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by north_coco887 at 2012-06-07 14:09:46
好像是利用纤维素酶扩散的原理,产酶量高,扩散的范围就大,会不会和琼脂浓度有关系呢?以前做过一点儿,后来不用了。不是降解CMC-Na的都能产纤维素酶。

那这样的话,第一步的初筛就没办法进行着……琼脂的浓度是2%,应该影响不大吧,而且我做的如果刚果红的浓度太高的话,会抑制菌的生长,现在的主要问题就是透明圈很不明显,有没有什么解决的办法呢?
其实不幸福,其实还爱她,只是无法说出口
3楼2012-06-07 15:24:01
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖交流 2012-06-07 23:01:44
哥们,俺研究生就做和你一样的课题。
首先,在配置羧甲基纤维素培养基时,将羧甲基纤维素钠加入到培养基中然后加热至八十摄氏度,一直搅拌,直至羧甲基纤维素钠溶解为止。
其次,千万别在培养基中加刚果红,我也做过的,水解圈效果不明显,刚果红抑制微生物生长。
应该是在未加刚果红的培养基上培养微生物,待微生物菌落长大后,添加1mg/ml的刚果红溶液浸泡半个小时后,用NaCl溶液浸泡后,用蒸馏水冲洗,透明全就出来了
祝福你
分享信息,提高自己
4楼2012-06-07 17:45:50
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