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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 纤维素酶高产菌株筛选时的透明圈问题
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
mc2840261: 回帖置顶 2012-06-12 10:47:33
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠（CMC）培养基（参考察氏培养基，用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定羧甲基纤维素钠添加量为0.8%，并在其中添加适量氯霉素以抑制细菌和放线菌的生长，其余配方不变；CMC不易溶于水，在配制该培养基时，加入CMC后，需在80℃的水浴锅中加热2h并不断搅拌使CMC充分溶解。）
CMC  0.8% ，NaNO3  0.3%， KCl  0.05%， K2HPO4  0.1%，FeSO4  0.001%，
MgSO4•7H2O  0.05%， 琼脂 2%，氯霉素 0.005%，pH 6.0 ,115℃灭菌15min
刚果红实验步骤待所点菌种在CMC平板上长出可见菌落后，往平板里加入适量1mg/ml的刚果红溶液，染色1h后，弃去染色液，并同时用蒸馏水清洗，最后加入适量1mol/L的NaCl溶液，脱色1小时，观察水解圈直径与菌落直径的大小。
附件中试我当时做的图片
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    • 2012-06-08 09:40:36, 1.08 M
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11楼2012-06-08 09:40:39
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mc2840261

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by two at 2012-06-08 09:06:42
说明你的菌种不行呀，哥们儿！重筛吧！俺们就是直接筛，大的很呀。

菌比菌……伤不起啊……
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其实不幸福，其实还爱她，只是无法说出口
12楼2012-06-08 10:02:19
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mc2840261

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yhjcwangyw at 2012-06-08 09:32:53
我当时也是培养的真菌（霉菌），首先你确定你培养的真菌能分解羧甲基纤维素钠吗，分解能力很强吗？如果培养的真菌不能分解羧甲基纤维素钠的话，你后面做的再好也不会出现透明圈的，其次你的培养基呢，一定要保证羧 ...

我的也是霉菌，它可以生长，说明绝对是可以分解的，因为CMC-Na是唯一碳源啊！培养基里CMC我是加热到完全透明，没有块状就行了，应该是全溶解了吧~我估计是培养基成分不行，我再加点东西进去试试~
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其实不幸福，其实还爱她，只是无法说出口
13楼2012-06-08 10:04:56
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mc2840261

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yhjcwangyw at 2012-06-08 09:40:39
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠（CMC）培养基（参考察氏培养基，用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定羧甲基纤维素钠添加 ...

嗯 很感谢你  你的透明圈很大  我做出来就只有在边缘有隐约的一圈，我估计那个算不上是透明圈，我采用你的培养基试试吧，期待着可以出来啊！我已经被折磨几个月了，痛苦啊……充分溶解的这个是不是说它透明无块状就可以了呢？
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其实不幸福，其实还爱她，只是无法说出口
14楼2012-06-08 10:08:26
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ddan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用以羧甲基纤维素钠做唯一碳源，若菌种能长出来，是否能证明该菌株具有讲解纤维素的能力呢
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15楼2012-06-08 10:42:43
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mc2840261

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ddan at 2012-06-08 10:42:43
用以羧甲基纤维素钠做唯一碳源，若菌种能长出来，是否能证明该菌株具有讲解纤维素的能力呢

可以说明！ 但是不能说明它能力的大小，只能说明它具有这种能力！
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其实不幸福，其实还爱她，只是无法说出口
16楼2012-06-08 11:28:01
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mc2840261

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yhjcwangyw at 2012-06-08 09:40:39
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠（CMC）培养基（参考察氏培养基，用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定羧甲基纤维素钠添加 ...

还要麻烦下你了，我用你的方法了，还是染不出来，菌落有，但就是没有透明圈啊，能帮我分析下是什么原因么？拜谢了……
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其实不幸福，其实还爱她，只是无法说出口
17楼2012-06-10 21:55:44
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by mc2840261 at 2012-06-10 21:55:44
还要麻烦下你了，我用你的方法了，还是染不出来，菌落有，但就是没有透明圈啊，能帮我分析下是什么原因么？拜谢了……...

你好！我感觉应该是菌种的问题了吧，因为能在该平板上长的也不一定就能产生水解圈，我当时好多菌种都能在该平板上生长，但也不产生水解圈，从自然界筛选产纤维素酶的菌种很困难的，如果你是为了做论文，我建议你两条路同时走，一条就是从自然界筛选，接着你现在的往下做；另一条就是购买现有的菌种，然后采用诱变等方法，提高其产酶能力，也是一条路子。单纯依靠从自然界筛选风险还是比较大的
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18楼2012-06-12 11:20:30
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wusgz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yhjcwangyw at 2012-06-08 09:40:39
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠（CMC）培养基（参考察氏培养基，用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定羧甲基纤维素钠添加 ...

问一下：为什么可以生长，却没有水解圈呢？这是唯一的碳源啊？不能分解就不能得到碳源啊@
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19楼2012-10-16 16:57:45
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wangliyc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yhjcwangyw at 2012-06-08 09:40:39
这是我当时用的培养基
羧甲基纤维素钠（CMC）培养基（参考察氏培养基，用羧甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落生长情况以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定羧甲基纤维素钠添加 ...

我的菌被我洗掉了。。。
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20楼2013-01-03 21:47:51
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