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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！

有没有人用Western blot在做17kDa左右的蛋白质分子
现在知道分离胶需要使用15%，转膜之后丽春红染色只能看到大分子条带，小分子的看不到。
求解：
电泳时的电压，时间应该用多少的？？？
转膜的条件又如何，比如电压、时间？？？注：本实验室使用湿转还有没有其他的注意事情，比如蛋白提取过程的问题，有人说小分子的蛋白比较容易降解。。。

[ Last edited by 神经再生 on 2012-6-4 at 09:50 ]
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1楼 2012-05-30 09:34:23
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ajinch

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
神经再生: 金币+1 2012-06-01 22:55:46
我用的300mA，30min。冰水浴。0.22uM的膜。做的14kD，没有问题。
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10楼2012-05-31 21:15:42
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ajinch

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 神经再生 at 2012-06-01 22:57:31
100v 1h条件下 42kD 的内参 actin  可不可以转过去  因为我想在同一张膜上做两个抗体，  蛋白量比较少...

一般四十kd的我也就用45min.内参我觉得一般问题不大。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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18楼2012-06-02 12:53:49
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