| 查看: 4540 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
如何提高连接效率呢？
|
||
|
各位科研上的战友，大家帮我看看分析一下实验失败的原因。 我是从T载体上双酶切（酶为EcoR I和Sal I）下了我的目的片段，然后载体也已经用相同的酶的线性化，做到连接转化这一步老是不成功，很困惑。 连接体系是： 片段 6ul 线性化载体 2ul T4ligase 1ul buffer 1ul total 10ul 16℃反应4h，4℃过夜，之后加100ul感受态。转化 在转化和感受态都是没问题的，因为做了对照试验。 我的浓度比基本都是看条带marker亮度估算的，没用相关仪器来检测准确浓度。 很多战友都说要不断摸索片段和载体的浓度比【这步是否需要呢？】。那这样是否需要很多次的连接转化呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 有机问高分子的问题！~！蛋白连接，金币可追加，求大神
已经有13人回复
- 提高DNA连接效率操作问题
已经有19人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- puf酶与普通Taq酶混用PCR问题
已经有22人回复
- 【讨论】芳香胺成酰胺的反应（与酸酐或者二羧酸）
已经有9人回复
- 【求助/交流】如何提高连接效率？
已经有5人回复
- 【求助/交流】连接效率问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？
已经有27人回复
6楼2012-05-29 14:34:25
yunocn
金虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1005.4
- 散金: 26
- 帖子: 165
- 在线: 122.5小时
- 虫号: 1175684
- 注册: 2010-12-23
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-05-28 17:17:27
caohaojie316
铜虫 (正式写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 174
- 散金: 619
- 红花: 5
- 帖子: 337
- 在线: 62.1小时
- 虫号: 1830322
- 注册: 2012-05-22
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2012-05-28 21:47:49
countingcrow
铁杆木虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 7322.6
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 271
- 在线: 520.2小时
- 虫号: 1807081
- 注册: 2012-05-09
- 性别: GG
- 专业: 自身免疫性疾病
4楼2012-05-29 06:33:32
