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wmjqy

新虫 (初入文坛)

[交流] 逆转录的时候体系要求RNA的最大量是 50ng/ul ，大于这个数会有什么样的后果？？？ 已有3人参与

请教一下各位高手。我在做逆转录的时候体系要求RNA的最大量是 50ng/ul ，但是加入的量却远远大于这个数。我想知道，如果是大于这个量是不是体系就不能逆转了？还是超过这个最大限量，它也只是按50ng/ul进行逆转录？？？？？

[ Last edited by wmjqy on 2012-5-29 at 00:30 ]
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1楼 2012-05-25 20:12:23
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 西瓜斑斑辛苦了 2012-05-27 17:32:01
超过这个量，首先是反转录酶的能力有限，不能全部RNA都反转录，如果用来做定量，结果会不准确（不能保证你需要的特定RNA全部被反转录了）。其次，如果加入的体积过大，提取RNA时残留的一些试剂可能会影响酶活力。
不知道你的cDNA打算拿来做什么，如果是做PCR，那实在没必要加过量的RNA啊。
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wmjqy
2楼2012-05-25 20:33:49
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微微右旋

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不晓得你要来干什么。我一般为了省试剂都把这个体系减半了。
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3楼2012-05-27 00:38:47
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-05-25 20:33:49
超过这个量，首先是反转录酶的能力有限，不能全部RNA都反转录，如果用来做定量，结果会不准确（不能保证你需要的特定RNA全部被反转录了）。其次，如果加入的体积过大，提取RNA时残留的一些试剂可能会影响酶活力。
...

我是用来做实时荧光定量PCR（QRT-PCR）的。还有想请教高手，我的PCR结果与Western Bolting结果相反。您遇到过这样的问题吗？谢谢！
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4楼2012-05-27 00:40:59
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 微微右旋 at 2012-05-27 00:38:47
不晓得你要来干什么。我一般为了省试剂都把这个体系减半了。

稀释的时候算错了。使得加入的剂量远远大于实际剂量。我之前也是用给定的体系逆转录。得到的cDNA我一般会稀释10倍之后再用。想请问一下，我稀释10倍之后会引起结果逆转吗！？？
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5楼2012-05-27 00:46:20
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by wmjqy at 2012-05-27 00:40:59
我是用来做实时荧光定量PCR（QRT-PCR）的。还有想请教高手，我的PCR结果与Western Bolting结果相反。您遇到过这样的问题吗？谢谢！...

我没遇到这个问题，因为我没做过western
不过培训qPCR时，公司的人有说过，有时候会有这种情况，不过具体的我记不得了，不好意思啦。
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6楼2012-05-27 17:39:58
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sillyfoxzl

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmjqy at 2012-05-27 00:46:20
稀释的时候算错了。使得加入的剂量远远大于实际剂量。我之前也是用给定的体系逆转录。得到的cDNA我一般会稀释10倍之后再用。想请问一下，我稀释10倍之后会引起结果逆转吗！？？...

我也是，那你最后怎么办，我今天才发现错了

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7楼2016-06-21 23:35:39
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