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麻烦大家给我分析一下电泳图
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急！！！这是我新构建的质粒分别提取质粒和酶切后跑的电泳，但是跑出来的带很奇怪。这次提取的质粒是直接从以前培养的平板上挑的单菌落，然后摇菌过夜，用TIGEN试剂盒提取的。之前已经做过验证结果都挺好的。由于我要将这个构建好的质粒转入革兰氏阳性菌中，而最近转了好几批都没转进去，想知道出现这样的结果是为什么? 这个是新提的质粒做的酶切。1泳道是Marker，大小从下到上分别是：250-500-750-1000-1500-2000-2500-3000-3500-4000-5000-6000-8000-10000，2泳道是提取的质粒，大小应该是7100bp，3泳道是我酶切的结果，本来应该是两条带，分别是2700bp和4500bp，但是却切出来三条带，这是为什么呀？  这是我之前体制里做的酶切验证，marker和前面的一样。第3泳道是我酶切的结果。但是质粒是我用自己配的碱裂解液提取的，所以下面有很亮的带。我想知道用手提的质粒做电转老是转不进去，会不会是因为受下面那个亮带的影响。 |
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不鸣鸟
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8楼2012-08-03 19:07:57
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jimmy7633
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【答案】应助回帖
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1.质粒跑出来的电流明显不对，http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以参考一下。 2.但是酶切图中目的片断都有，只是中间多了一道，或许是没有切完全的质粒。（用别的酶切一下，看看有没有目的片断） 3..会不会是污染了别的质粒。以前构建的质粒有保存大肠杆菌宿主菌吧，建议重新划线，再挑单菌落。后重新提质粒。可以挑三四个同时做对比。 |
4楼2012-05-25 20:21:00
