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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条带不稳定的原因
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[交流] PCR条带不稳定的原因 已有6人参与

最近在做PCR，出来条带总是不稳定。今天55摄氏度PCR，出来淡淡条带。明天做个温度梯度（包含原来的55℃）就没有条带，很奇怪呀！！   重复两次了，都一样！  无法分析，不理解呀！！  各位大侠  能否指点迷津！！感激不尽！

[ Last edited by 1949stone on 2012-5-26 at 11:59 ]
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勤能补拙
1楼 2012-05-23 16:48:29
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 梯度还是比较保险的 2012-05-26 12:00:32
哈哈，那就先别梯度再重新试试55摄氏度吧。如果其他条件都没问题且条带单一的话，有可能是引物的问题了。或者你尝试下TOuch Down
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好好学习，天天向上
2楼2012-05-24 09:50:15
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dayulee at 2012-05-24 09:50:15:
哈哈，那就先别梯度再重新试试55摄氏度吧。如果其他条件都没问题且条带单一的话，有可能是引物的问题了。或者你尝试下TOuch Down

谢谢！！回头试试！
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勤能补拙
3楼2012-05-24 11:31:36
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maoyong

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 原因比较复杂 2012-05-26 12:00:52
你的引物如果是特异引物的话，有可能是特异性不强，或是模板有问题，可以重新设计下引物
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4楼2012-05-25 07:36:00
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435632866

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: , 退火温度在低一点都可以 2012-05-26 12:01:13
如果觉得引物没有问题的话，试试将退火温度提高或者降低一度。
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5楼2012-05-25 09:58:00
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elbo

金虫 (小有名气)
确定模板纯度和浓度
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6楼2012-05-26 11:35:35
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waldenpond

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-24 11:31:36
谢谢！！回头试试！...

楼主做了Touchdown了么？结果怎么样。
最后找到原因了嘛？
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7楼2012-09-02 14:56:24
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by waldenpond at 2012-09-02 14:56:24
楼主做了Touchdown了么？结果怎么样。
最后找到原因了嘛？...

恩，条带出来了，虽然淡淡的，但切胶回收经过测序没问题，就是所要基因的片段。现在正在做RACE。呵呵，悲剧的RACE。
赞一下 回复此楼
勤能补拙
8楼2012-09-02 15:30:49
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guanjinyan87
9楼2012-11-27 22:00:05
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