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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

[交流] PCR条带不稳定的原因 已有6人参与

最近在做PCR,出来条带总是不稳定。今天55摄氏度PCR,出来淡淡条带。明天做个温度梯度(包含原来的55℃)就没有条带,很奇怪呀!!   重复两次了,都一样!  无法分析,不理解呀!!  各位大侠  能否指点迷津!!感激不尽!

[ Last edited by 1949stone on 2012-5-26 at 11:59 ]
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勤能补拙
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 梯度还是比较保险的 2012-05-26 12:00:32
哈哈,那就先别梯度再重新试试55摄氏度吧。如果其他条件都没问题且条带单一的话,有可能是引物的问题了。或者你尝试下TOuch Down
好好学习,天天向上
2楼2012-05-24 09:50:15
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dayulee at 2012-05-24 09:50:15:
哈哈,那就先别梯度再重新试试55摄氏度吧。如果其他条件都没问题且条带单一的话,有可能是引物的问题了。或者你尝试下TOuch Down

谢谢!!回头试试!
勤能补拙
3楼2012-05-24 11:31:36
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maoyong

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 原因比较复杂 2012-05-26 12:00:52
你的引物如果是特异引物的话,有可能是特异性不强,或是模板有问题,可以重新设计下引物
4楼2012-05-25 07:36:00
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435632866

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: , 退火温度在低一点都可以 2012-05-26 12:01:13
如果觉得引物没有问题的话,试试将退火温度提高或者降低一度。
5楼2012-05-25 09:58:00
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elbo

金虫 (小有名气)

确定模板纯度和浓度
6楼2012-05-26 11:35:35
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waldenpond

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-24 11:31:36
谢谢!!回头试试!...

楼主做了Touchdown了么?结果怎么样。
最后找到原因了嘛?
7楼2012-09-02 14:56:24
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by waldenpond at 2012-09-02 14:56:24
楼主做了Touchdown了么?结果怎么样。
最后找到原因了嘛?...

恩,条带出来了,虽然淡淡的,但切胶回收经过测序没问题,就是所要基因的片段。现在正在做RACE。呵呵,悲剧的RACE。
勤能补拙
8楼2012-09-02 15:30:49
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9楼2012-11-27 22:00:05
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