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yag768

铜虫 (初入文坛)

[求助] 用乙醇沉淀多糖或蛋白时加入盐的浓度

用乙醇沉淀多糖或蛋白时加入盐(如NaCl)的作用是什么?盐浓度应为多少,怎样去确定?
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我自横刀向天笑
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痴夷子皮

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【答案】应助回帖


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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-15 22:46:01
盐析。加入盐后,使多糖或蛋白溶解度降低而析出,浓度一般都要摸索。
守候在风中的宁静。
2楼2012-05-15 21:36:00
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yag768

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-15 21:36:00:
盐析。加入盐后,使多糖或蛋白溶解度降低而析出,浓度一般都要摸索。

我看文献上加入的盐浓度都很低,大都在0.1-0.25mol/L之间,那应该还是在盐溶条件下啊。尽管有乙醇存在,但我认为这也不是盐析的原理吧?再提取DMA是我查到这样一句话“高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合,后者是因为钠盐与SDS-蛋白复合物作用后,能形成较小的钠盐形式复合物,使沉淀更完全。”我想原理应该差不多,关键是这个浓度的问题,浓度无所谓吗?低了高了有什么不良后果?
我自横刀向天笑
3楼2012-05-15 21:45:23
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yag768

铜虫 (初入文坛)

yag768: 回帖置顶 2012-05-15 21:53:10
我自己查到了!!!下面的原理应该差不多。
在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1~0.25mol/L? 在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。
我自横刀向天笑
4楼2012-05-15 21:52:45
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