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璇玑lexi

新虫 (小有名气)

[求助] 求助各位大侠！！GUS染色总是染不出好的效果怎么办

最近在做大豆GUS瞬时表达率方面的试验，可是GUS染色效果总是不理想，染上颜色的外植体数量非常非常少，而且也只是零零星星的蓝点，要不然就是染色的位置不对~~这是怎么一回事啊，菌株是不会有问题的啊

这是我GUS染色液的配方：
A  0.2M   P.Buffer    PH 7.0
          KH2PO4 (MW 136.09)    27.22g/L
          KHPO4 (MW 174.20)    34.84g/L     混合 PH 7.0
B  水
C  10%   Tri tonx-100
        10ml  Tri nx-100用ddH2O 定容至100ml
D 38.8 Mm X-glu-tock solution
        49.4 ml二甲基甲酰胺 (DMF)溶解1g (100mg)
        X-glu分装  -20℃保存
E   50mm  K3Fe(CN)6  (MT 329.26)
           16.464g/L  ddH2O
F  50mm  K4 Fe(CN)6     (MT 368.358, 18.179g/L)
G  100mM  EDTA钠盐

比例是1ml的染色液里，P.Buffer500ul，Tri tonx-100 K3Fe(CN)6  K4 Fe(CN)6 各加10ul，EDTA钠盐 100ul，X-glu 25.78ul，剩下的用ddH2O补齐，将外植体用染色液浸泡并37℃水浴，后用70%酒精脱色~~

就是这样，可是效果总是不理想，有没有哪位帮我分析下原因啊  谢谢！！
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1楼 2012-05-15 11:23:31
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lancai198792

铁虫 (初入文坛)
弱弱地问一句，你现在有没有解决问题啊？
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2楼2012-09-07 21:15:40
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xiemin217

木虫 (正式写手)
脱色问题吧，要图片才好说
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3楼2012-09-09 21:05:02
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