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tawnya

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我的PCR总是有的跑出来了,有的跑得不好?

换了很多模板,甚至把引物也换了,在同一块琼脂糖上,依旧是有的模板能跑出来,有的跑得不(目的条带有,但很模糊)。如果不是模板的问题,那是什么原因呢?
请大家帮我一下吧,我跑了两个月,快崩溃了。
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

内参?
梯度过,还有有阳性对照? 条件没问题?
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
2楼2012-05-10 21:13:03
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-11 17:36:52
你做的啥模板呢?纯化过没呢?新鲜样品吗?最好上个图,大家帮你分析哦。
我以前也碰过你这样的情况,最后的原因就是,模板DNA降解了,因为我是手提的基因组DNA,提出来一眼都看出来不纯,刚做PCR还可以扩增出来,越到后面越是扩不出条带,到最后就跟你情况一样了。后来我分析是杂质太多,模板DNA到最后就降解了。
现在用试剂盒提,效果很好。
3楼2012-05-11 14:07:30
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