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youngsun50木虫 (正式写手)
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[求助]
双向电泳条纹等问题求助
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各位大侠，我的样品（G-细菌）裂解后经TCA丙酮沉淀处理的，复溶时大约损失了1/3，水化上样大约900ug，胶条pH3-10,24cm,如图到处都是横条纹，应该是没有聚焦完全（条件8KV，72KVh）请问 1）难道TCA丙酮沉淀除盐不彻底吗，有人说直接用超滤除盐就行不知效果如何 2）胶条pH选择问题，我的大多集中在4-8之间，太密集了，但也有的在之外，不知用重新选择吗 3）聚丙烯酰胺凝胶破碎问题，10%，操作过程中经常破碎 结果如下图，希望有做过的大侠指点一下，谢谢   +到-，pH3-10（线性），24cm |
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 蛋白质生物学实验经验 | 电泳、bio-rad 电转化仪及操作 |
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7楼2012-05-22 15:36:16
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youngsun50: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-22 12:52:18
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TCA丙酮沉淀丢蛋白比较厉害，除盐效果应该还行。楼主这个上样量，我在跑的时候要聚焦10万vhrs。 超滤除盐没做过。 楼主的裂解液含盐很多吗？为什么用TCA丙酮沉淀了？没做过G-细菌，不很了解。 胶条的选择，初次跑摸条件肯定要用宽范围的，找到感兴趣的蛋白再用窄范围的。 胶破碎问题，一般情况下胶是比较有韧性的，不很容易裂，拿的时候小心就是。如果胶很脆，考虑缓冲液的pH是否正常。制备好的胶最好马上用，保存的话要保鲜膜包好，加水或者胶buffer。不包的话很快就干了。 希望对你有用。 |
2楼2012-05-22 10:34:52
youngsun50
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3楼2012-05-22 12:50:50
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