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c3024034

银虫 (正式写手)

[求助] 抗体检测的问题

为什么有的抗体只检测内源蛋白无法检测外源性蛋白？
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1楼2012-05-10 12:23:15
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-18 15:31:16
某种抗体识别的是抗原上的特定的抗原免疫簇--------包括顺序抗原免疫簇和空间抗原免疫簇，没有抗原免疫簇就不会有抗体-抗原的专一性结合，这与蛋白质来源无关。
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2楼2012-05-18 12:14:54
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-05-18 12:14:54:
某种抗体识别的是抗原上的特定的抗原免疫簇--------包括顺序抗原免疫簇和空间抗原免疫簇，没有抗原免疫簇就不会有抗体-抗原的专一性结合，这与蛋白质来源无关。

但我们买的一个抗体为什么只能检测内源的呢？而我们转染进去表达的蛋白却无法检测，同一种蛋白
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3楼2012-05-20 15:45:59
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 辛苦 2012-05-22 13:49:11
这就是你表达的蛋白质有问题，或者被共价修饰了，包括加了或减了有关的基团，而阻碍抗体靠近，或者引起了不正确的折叠，改变了抗原表位。
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4楼2012-05-20 19:32:38
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-05-20 19:32:38:
这就是你表达的蛋白质有问题，或者被共价修饰了，包括加了或减了有关的基团，而阻碍抗体靠近，或者引起了不正确的折叠，改变了抗原表位。

在做WESTERN的时候，蛋白被煮了后，应该不存在折叠或共价修饰了吧？基因我们去测序也是没问题的
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5楼2012-05-22 10:48:12
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by c3024034 at 2012-05-22 10:48:12:
在做WESTERN的时候，蛋白被煮了后，应该不存在折叠或共价修饰了吧？基因我们去测序也是没问题的

蛋白质被煮了只是变性了，三维结构发生了变化，与共价修饰无必然联系！
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6楼2012-05-22 20:46:23
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

蛋白质变性后也并不是不存在了三维结构，有时变性后会形成新的抗原免疫簇，同时可能破坏或掩盖原有的抗原免疫簇。
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7楼2012-05-22 20:48:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by c3024034 at 2012-05-22 10:48:12:
在做WESTERN的时候，蛋白被煮了后，应该不存在折叠或共价修饰了吧？基因我们去测序也是没问题的

你用MS测定两者的相对分子量，可以区别出是否存在共价修饰：用紫外和红外测定两者光谱，可以大致看看是否有二级和三级结构改变。
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8楼2012-05-22 21:10:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

基于Ediman降解法的蛋白质自动测序仪不能直接测出共价的氨基酸残基，用质谱仪可以直接测定出共价的氨基酸残基，不过用质谱仪测序比较贵，你可以用胰蛋白酶或胰凝乳蛋白质酶切割内源和外源的同种蛋白质，用用质谱仪测定出各个肽段的分子量，加以比较可知道修饰位点大致在那里，然后对该段肽段测定修饰位点和类型，可用质谱，也可用化学方法。
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9楼2012-05-23 16:57:01
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