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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙看看我这个质粒怎么踢出来成了这样？
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lw19850128

银虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看看我这个质粒怎么踢出来成了这样？

质粒大小为5892bp，amp抗性，转化感受态后，在抗性板上过夜培养，生长良好，可提出的质粒跑胶居然出现两条带，而且大小还不合适。。。怎么搞的啊？转化用的质粒之前电泳过大小正常。  这里为啥会出现两条带啊？ marker用的是takara的1kb，片段依次为 1000，,2000,3000,4000，5000,6000,7000...最大为10000bp,望诸位高手给与解答~
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1楼 2012-05-10 10:20:15
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切后电泳看看，现在的这张图不能最终确定。
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活着就要让人感受到你的存在。
2楼2012-05-10 10:42:32
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒嘛，存在不同的形态，还有跑出三条带的。
大小对不对，单酶切后电泳才能看出来。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-05-10 11:10:41
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lw19850128

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-10 11:10:41:
质粒嘛，存在不同的形态，还有跑出三条带的。
大小对不对，单酶切后电泳才能看出来。

跑出三条带是因为酶切的原因吧？我的还没切过。。。。而且之前没出过这个问题啊。。。
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4楼2012-05-10 11:34:42
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个最大的条带是基因组DNA，提的时候混匀太剧烈，导致基因组DNA断裂，与质粒DNA一起提出来了。
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5楼2012-05-10 12:27:37
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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lw19850128: 金币+1, ★★★很有帮助, 饿。。。提质粒的盒子也能提出基因组么？ 2012-05-10 14:20:25
你的小的那个应该是质粒，大小差不多，超螺旋质粒比线性的要小。较大的那个应该是基因组。
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未来不是梦
6楼2012-05-10 13:00:05
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fly12365

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒是螺旋结构的，体积小，电泳迁移率比线性的快，可以酶切一下，看看目的片段有没有，确定是否连接上。上面那条带应该是感受态的基因组。
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7楼2012-05-11 23:20:08
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上的各位都说的对，质粒有不同的形态，我也遇到过这样的问题， 做了酶切解决了！
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8楼2012-05-12 09:31:58
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damaomao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
9楼2012-05-12 10:20:45
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凤尾竹1986

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒跑电泳时，泳动速度与分子质量和构象有关！未酶切前。不能以DNA Marker来判断其分子质量，需用酶切后条带分析
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转弯遇见奇迹
10楼2012-05-12 10:44:34
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