| 查看: 2191 | 回复: 11 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
rebornpro铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
PCR产生非特异性带
|
||
RT，最近PCR摸索条件，引物单子上写的退火温度是45°（好低啊），这个是45°退火P出来的图，MARKER是DL2000，很奇怪，PCR产物的理论值应该是900多的样子（上面那个不亮的带），结果产物只有500的样子。现在不管产物大小了，就把那个不亮的当非特异性带吧。如何改进PCR条件把这个非特异性带给它去掉。求人解答。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求解！Pcr循环数问题...
已经有8人回复
- 急救啊！各位大虾，PCR扩基因有杂带(有图)！
已经有11人回复
- 连接后转化子PCR出现非特异性的条带
已经有10人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】真菌分子鉴定问题
已经有16人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【分享】提高PCR特异性的方法
已经有10人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
xiaoxiong520
银虫 (初入文坛)
- MolEPI: 4
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 463.4
- 帖子: 49
- 在线: 19.3小时
- 虫号: 1400961
- 注册: 2011-09-14
- 性别: MM
- 专业: 观赏园艺学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good! 2012-05-10 11:27:36
rebornpro: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-10 17:22:28
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good! 2012-05-10 11:27:36
rebornpro: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-10 17:22:28
|
1、引物的特异性较差。这种情况下，可能会出现很难消除的非特异性扩增；如果模板好的话，多半会有目的片断出现。 2、模板不好。比如，RNA提取得不好，里面有基因组DNA污染或RNA降解比较严重，最终导致cDNA的质量不好。 3、Taq酶出现了问题。保存不当会导致活性改变，从而容易扩出非特异性条带； 若确定引物设计没有问题，以及模板的纯化外，Mg2+浓度过高也会导致非特异性扩增的。还有一个问题就是 可能你的目的基因GC含量比较高，这个可以用软件分析一下，如果GC含量高或者有复杂的二级结构，普通的Taq很难扩增出目的基因。 |
rebornpro3楼2012-05-10 10:17:25
cheng_xiao
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 3645.2
- 帖子: 273
- 在线: 62.7小时
- 虫号: 1553648
- 注册: 2011-12-27
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2012-05-10 09:54:12
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
4楼2012-05-10 10:30:49
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
5楼2012-05-10 10:32:16
