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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

MolEPI: 4
应助: 8 (幼儿园)
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good! 2012-05-10 11:27:36
rebornpro: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-10 17:22:28

1、引物的特异性较差。这种情况下，可能会出现很难消除的非特异性扩增；如果模板好的话，多半会有目的片断出现。
2、模板不好。比如，RNA提取得不好，里面有基因组DNA污染或RNA降解比较严重，最终导致cDNA的质量不好。
3、Taq酶出现了问题。保存不当会导致活性改变，从而容易扩出非特异性条带；
若确定引物设计没有问题，以及模板的纯化外，Mg2+浓度过高也会导致非特异性扩增的。还有一个问题就是可能你的目的基因GC含量比较高，这个可以用软件分析一下，如果GC含量高或者有复杂的二级结构，普通的Taq很难扩增出目的基因。