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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光PCR，想做标准曲线
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zhoujiang09

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光PCR，想做标准曲线 已有3人参与

我最近在跑荧光PCR，想做标准曲线，设了2个复孔，可是跑出来的结果不满意，ct值都不在那标准曲线上，还有扩增效率是92.76%，相关系数是0.72，斜率是-3.6，我设了三排复孔为什么有些浓度跑出来的ct值总是偏离那直线呢，请大家帮我分析分析。另，我做的是相对定量。
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1楼 2012-05-03 20:50:12
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txw87

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
标准曲线即使是相对定量在进行之前也要先定好每个孔的理论模板量。一般都是定个10倍降低的梯度，把你的标准品也做几个10倍梯度稀释然后跑pcr。不知道你用的仪器是哪款？有可能是设置问题，另外稀释的操作也很重要

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-05-03 23:50:33
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sdytzxy1856

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-04 13:49:07
稀释的时候要充分，建议每次稀释后不要用枪吸打，只要充分震荡离心即可。如果是用DNA做标准曲线，是会不准的，可以把偏离标准曲线的点去掉，所以建议做3个重复，5个10倍的梯度。
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3楼2012-05-04 10:08:06
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zhoujiang09

新虫 (初入文坛)
4楼2012-05-05 18:16:39
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不在线上正常，如果在线上，相关系数就成1了，除非标准品，即使是内参也很少出现全部在线上的情况，必要的时候你要舍弃一些点
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5楼2012-05-05 18:32:29
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