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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助细胞内活性氧定量检测实验方法！
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ycl630328

金虫 (小有名气)

[交流] 求助细胞内活性氧定量检测实验方法！

如题：
       本人正在做细胞内活性氧的检测，用了碧云天的活性氧检测试剂盒，说明书上说可以通过酶标板测定荧光值。但具体的操作是怎样的呢？我是用96孔板培养细胞，然后加药刺激，之后清洗，直接在酶标仪上检测，但荧光值只有20左右，而且没有什么大的变化。
       所以想请问各位大侠你们是怎么定量检测细胞内的活性氧呢？参阅了很多文献，都只是说定量检测，实验细节都木有提~
       谢谢啦！！！
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1楼 2012-04-26 12:55:10
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★
ycl630328(金币+1): 谢谢参与
可以用流式细胞仪和激光共聚焦！！呵呵
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3楼2012-04-27 18:42:45
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ycl630328

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-27 18:42:45:
可以用流式细胞仪和激光共聚焦！！呵呵

嗯， 是的，但是老板说可以直接测定量的，不是用流式，直接测定荧光
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4楼2012-04-27 19:36:22
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普通回帖

ycl630328

金虫 (小有名气)
谢谢，昨天这些帖子我也都看到了，但是没有涉及到测胞内活性氧的具体的操作问题
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2楼2012-04-27 18:39:23
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
ycl630328(金币+1): 谢谢参与
可以使用H2O2荧光探针H2DCFDA
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5楼2012-04-27 22:11:11
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chengfangfang

木虫 (正式写手)
★ ★
ycl630328(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 10:23:47
酶标仪上测得是吸光值还是荧光值？定量的话要作标准曲线吧。先做一个不同浓度H2O2氧化DCFA荧光值，做一条标准曲线，X轴为h2O2浓度，y轴是荧光值，得出一个方程，在看你样品的荧光值即Y值是多少，对应的X值就是你要的浓度。
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6楼2012-04-28 09:42:35
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ycl630328

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2012-04-27 22:11:11:
可以使用H2O2荧光探针H2DCFDA

嗯， 就是买了碧云天的活性氧检测试剂盒，成分就是H2DCFDA,但是不知道具体怎么个操作法
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7楼2012-04-28 13:14:51
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ycl630328

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chengfangfang at 2012-04-28 09:42:35:
酶标仪上测得是吸光值还是荧光值？定量的话要作标准曲线吧。先做一个不同浓度H2O2氧化DCFA荧光值，做一条标准曲线，X轴为h2O2浓度，y轴是荧光值，得出一个方程，在看你样品的荧光值即Y值是多少，对应的X值就是你要 ...

酶标板上要测荧光，就是DCF-DA的荧光值，关键是不清楚细胞的处理方式，要提前在6孔板里培养然后转到测荧光的酶标板上还是可以直接在酶标板上直接培养细胞，孵育完后直接检测
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8楼2012-04-28 13:17:10
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chengfangfang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ycl630328 at 2012-04-28 13:17:10:
酶标板上要测荧光，就是DCF-DA的荧光值，关键是不清楚细胞的处理方式，要提前在6孔板里培养然后转到测荧光的酶标板上还是可以直接在酶标板上直接培养细胞，孵育完后直接检测

碧云天的应该可以96孔板上直接培养细胞，孵育完后直接检测的吧，扣背景。
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9楼2012-04-28 17:51:20
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ycl630328

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by chengfangfang at 2012-04-28 17:51:20:
碧云天的应该可以96孔板上直接培养细胞，孵育完后直接检测的吧，扣背景。

嗯，  96孔的试过了，但是荧光值太低了几乎检测不出来。我看人家文献多数十用6孔板的
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10楼2012-05-02 19:40:26
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sun_min

木虫 (小有名气)
★
ycl630328(金币+1): 谢谢参与
楼主现在解决问题了没？我也买的碧云天的试剂盒，这几天也要开始测了，我想细胞处理完，装载探针后测之前用不用将细胞在消化悬浮再测？
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11楼2012-05-19 17:50:33
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dandaner

银虫 (正式写手)
★
ycl630328(金币+1): 谢谢参与
试剂盒有细胞具体的处理步骤地吧，一般试剂盒说的很详细，然后是用新的板子来测定的，至于用几孔板，是根据你用的仪器来决定的！
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12楼2012-06-13 10:06:36
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nephrology

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，我也要做这方面的实验，能否把您的具体实验步骤发我一份，十分感谢，邮箱704046403@qq.com

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2013-09-09 11:23:20
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主 我也要做细胞活性氧定量测定 植物叶片的 请问你找到好的方法没有啊
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14楼2013-10-19 10:49:43
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水婉�?

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问楼主最后是怎么解决的   还有细胞浓度要求在120万-2000万/ml   这个怎么控制比较好
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15楼2014-09-03 16:17:47
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梦小爷meng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2013-10-19 10:49:43
楼主 我也要做细胞活性氧定量测定 植物叶片的 请问你找到好的方法没有啊

求问找到好方法没，最近也在做植物叶片的细胞活性氧测定。。。
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16楼2015-06-09 15:20:10
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啥孤独

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by 梦小爷meng at 2015-06-09 15:20:10
求问找到好方法没，最近也在做植物叶片的细胞活性氧测定。。。...

同求好方法，最近也在做柚子果实的细胞活性氧测定。。。
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17楼2015-08-25 18:27:44
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Ryanlex

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2013-10-19 10:49:43
楼主 我也要做细胞活性氧定量测定 植物叶片的 请问你找到好的方法没有啊

我也是要做这方面，但不明白脂质过氧化物算在ROS里吗？
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18楼2016-03-22 16:07:31
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朱伟伟

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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11楼: Originally posted by sun_min at 2012-05-19 17:50:33
楼主现在解决问题了没？我也买的碧云天的试剂盒，这几天也要开始测了，我想细胞处理完，装载探针后测之前用不用将细胞在消化悬浮再测？

不用消化悬浮，去掉培养基之后，原位装载探针
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19楼2016-04-01 19:06:04
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