| 查看: 3042 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
thestormcong银虫 (小有名气)
|
[求助]
red基因敲除
|
|
|
大家好，最近做red基因敲除，遇到困难，特地请求高人指点。 我将带有同源臂的打靶片段电转化入宿主细胞中，筛选转化子（我用的是卡纳抗性）。对转化子进行菌落pcr，菌落pcr的引物设计在待敲除基因的上下游。我挑了6个转化子，也做了阳性对照（原始株）。结果是有一个有条带，大小跟野生株的一样。另外5个都没有条带。我很纳闷！理论上来说的话应该都能扩增出条带，只是大小不同，可是为什么我有5个都没有能够扩增出条带呢？ 自己也分析了一下原因。 1：有可能是其他带有卡纳抗性的菌株的污染。可是我对这些菌株的别的基因进 行过菌落pcr（实验室有做该细菌别的基因），都是有条带的，表明这些还是我的菌株。 2：会不会是里面的同源交换出错了呢？但是细菌还是有卡纳抗性的。也对这个细菌提过质粒，没有发现质粒条带。 3：菌落pcr的问题吗？可是每一次的阳性对照都很正常啊。 综上所述，希望得到有经验的虫友的帮助，万分感谢！！！！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- red基因敲除转化子
已经有3人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 目的基因导入到受体细胞会发生基因重组吗？说说原因！
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除的方法
已经有18人回复
- 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】微生物基因敲除请进
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
7楼2012-04-26 11:40:09
张宏宇123
金虫 (著名写手)
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 388.9
- 帖子: 1084
- 在线: 93.8小时
- 虫号: 1766866
- 注册: 2012-04-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-04-25 22:45:27
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-04-25 23:18:54
fwks3518
木虫 (正式写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 4696.9
- 红花: 1
- 帖子: 368
- 在线: 146.1小时
- 虫号: 589028
- 注册: 2008-08-29
- 专业: 微生物遗传学
4楼2012-04-26 08:44:38
20