[交流] 求各位大神交流感受态制作心得

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1楼2012-04-24 16:09:36

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to-be

金虫 (正式写手)

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liuyu_sdili: 金币+4, 很有帮助 2012-04-24 20:09:27
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-04-24 20:16:18

我们经验是；
1.开始摇菌不要过了，宁可获得的菌体少，也不要太浓了。
2.停止生长要迅速，在冰上越快越好。
3.中间系的过程中一定要防止污染，防止冰滴或溅入菌体中。
4.做好要迅速液氮冷冻，-80度保存。
5.快速使用（2-3个月内），自己做的感受态放置过久效果很不好。

3楼2012-04-24 19:29:25

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phoenix.ren

金虫 (小有名气)

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liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢帮助！！ 2012-04-24 17:51:14
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-24 18:39:23

照着分子生物学的书上CaCl2法做就行了。主要是操作的时候注意低温，一般都没有问题的。

2楼2012-04-24 16:35:32

rhguo

铜虫 (小有名气)

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没有自己做过，不过好像用试剂盒会快很多

4楼2012-04-25 19:47:10

chibang1220

木虫 (著名写手)

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liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流经验 2012-04-26 08:57:12

就是按照说明书，低温，还有就是CaCl2，别的没什么，很简单

5楼2012-04-25 21:21:53

ixido

木虫 (小有名气)

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liuyu_sdili: 金币+2, 谢谢交流 2012-04-27 10:55:24
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-27 13:43:33

有一个传说中的hanaha法，可以做到很高，但是实验室里没有人成功实践出来。楼主只要按照分子克隆指南上的指导认真做就可以了，一般转化，甚至共转两个质粒都没有问题。
保持整个过程的低温是最重要的。

6楼2012-04-27 10:24:28

guozhixia121

铁虫 (初入文坛)

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liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流 2012-05-01 22:34:08

氯化钙法（Calcium Chloride）

本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞，所得感受态细胞可以获得5 x 106 到 2x 107 转化克隆/微克超螺旋质粒DNA

7楼2012-05-01 20:55:25

vir2008

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liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流 2012-05-02 19:57:01

氯化钙法一般可以满足要求了。

8楼2012-05-02 19:00:52

xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

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liuyu_sdili: 金币+5, 很好很有帮助 2012-05-03 08:55:36
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:38:36

我做过一般氯化钙和Inoue法，经验就是
1.氯化钙和Inoue要过滤灭菌，期间烧杯、容量瓶、勺子、注射器、量筒、纯水都要灭菌干燥后使用。保证什么都是干净的。
2.菌不能摇过了，大约0.3-0.5就可以了
3.我都是先分装菌，然后在做感受态的
4.在超净台工作，如果那段时间大家在做其他的基因克隆，做过连接和转化的话，我会选个另外的时间做。
5.氯化钙法，我都是当天摇菌当天做，Inoue法，都是过夜低温摇
6做好感受态，要在无抗和有抗的固体培养基上培养，以保证感受态没有被污染
7.感受态最好在三个月内用完

9楼2012-05-03 08:40:20