应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求各位大神交流感受态制作心得
101/1返回列表
查看: 2930  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[交流] 求各位大神交流感受态制作心得

最近用TSS法做的大肠杆菌感受态一直不好，很好奇传说中的10的八次方的效率是如何做出来的，特请各位大神交流一下经验，当然不仅限于TSS法~~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 【分子生物】EPI帖 核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-24 16:09:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix.ren

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢帮助！！ 2012-04-24 17:51:14
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-24 18:39:23
照着分子生物学的书上CaCl2法做就行了。主要是操作的时候注意低温，一般都没有问题的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-24 16:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+4, 很有帮助 2012-04-24 20:09:27
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-04-24 20:16:18
我们经验是；
1.开始摇菌不要过了，宁可获得的菌体少，也不要太浓了。
2.停止生长要迅速，在冰上越快越好。
3.中间系的过程中一定要防止污染，防止冰滴或溅入菌体中。
4.做好要迅速液氮冷冻，-80度保存。
5.快速使用（2-3个月内），自己做的感受态放置过久效果很不好。
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-24 19:29:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rhguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有自己做过，不过好像用试剂盒会快很多
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-25 19:47:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chibang1220

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢 交流经验 2012-04-26 08:57:12
就是按照说明书，低温，还有就是CaCl2，别的没什么，很简单
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-25 21:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ixido

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+2, 谢谢交流 2012-04-27 10:55:24
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-27 13:43:33
有一个传说中的hanaha法，可以做到很高，但是实验室里没有人成功实践出来。楼主只要按照分子克隆指南上的指导认真做就可以了，一般转化，甚至共转两个质粒都没有问题。
保持整个过程的低温是最重要的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-27 10:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guozhixia121

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流 2012-05-01 22:34:08
氯化钙法（Calcium Chloride）

本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞，所得感受态细胞可以获得5 x 106 到 2x 107 转化克隆/微克超螺旋质粒DNA
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-01 20:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vir2008

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流 2012-05-02 19:57:01
氯化钙法一般可以满足要求了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-02 19:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+5, 很好很有帮助 2012-05-03 08:55:36
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:38:36
我做过一般氯化钙和Inoue法，经验就是
1.氯化钙和Inoue要过滤灭菌，期间烧杯、容量瓶、勺子、注射器、量筒、纯水都要灭菌干燥后使用。保证什么都是干净的。
2.菌不能摇过了，大约0.3-0.5就可以了
3.我都是先分装菌，然后在做感受态的
4.在超净台工作，如果那段时间大家在做其他的基因克隆，做过连接和转化的话，我会选个另外的时间做。
5.氯化钙法，我都是当天摇菌当天做，Inoue法，都是过夜低温摇
6做好感受态，要在无抗和有抗的固体培养基上培养，以保证感受态没有被污染
7.感受态最好在三个月内用完
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-03 08:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小五来了

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是做的电转的大肠感受态，一般是10的9次方吧，好一点能达到10的10次方，关键就是接种过夜的菌后，大概养一个半小时，然后冰浴，转速不能太大，在用水和甘油洗的时候不能用力过猛，要轻轻的晃离心管，一点一点的用水刮下来，还有整个过程要保持低温，
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-29 14:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuyu_sdili 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 找导师 +5 yuanjiabao 2026-08-29 6/300 2026-08-30 11:52 by zhouyanli11
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:41 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:07 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 17/850 2026-08-30 10:28 by 孤独的英雄6
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭