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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求各位大神交流感受态制作心得
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

[交流] 求各位大神交流感受态制作心得

最近用TSS法做的大肠杆菌感受态一直不好，很好奇传说中的10的八次方的效率是如何做出来的，特请各位大神交流一下经验，当然不仅限于TSS法~~~
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1楼 2012-04-24 16:09:36
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guozhixia121

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢交流 2012-05-01 22:34:08
氯化钙法（Calcium Chloride）

本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞，所得感受态细胞可以获得5 x 106 到 2x 107 转化克隆/微克超螺旋质粒DNA
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7楼2012-05-01 20:55:25
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢帮助！！ 2012-04-24 17:51:14
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-24 18:39:23
照着分子生物学的书上CaCl2法做就行了。主要是操作的时候注意低温，一般都没有问题的。
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2楼2012-04-24 16:35:32
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to-be

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+4, 很有帮助 2012-04-24 20:09:27
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-04-24 20:16:18
我们经验是；
1.开始摇菌不要过了，宁可获得的菌体少，也不要太浓了。
2.停止生长要迅速，在冰上越快越好。
3.中间系的过程中一定要防止污染，防止冰滴或溅入菌体中。
4.做好要迅速液氮冷冻，-80度保存。
5.快速使用（2-3个月内），自己做的感受态放置过久效果很不好。
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3楼2012-04-24 19:29:25
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有自己做过，不过好像用试剂盒会快很多
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4楼2012-04-25 19:47:10
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