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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)


[交流] 求各位大神交流感受态制作心得

最近用TSS法做的大肠杆菌感受态一直不好,很好奇传说中的10的八次方的效率是如何做出来的,特请各位大神交流一下经验,当然不仅限于TSS法~~~
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+5, 很好很有帮助 2012-05-03 08:55:36
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:38:36
我做过一般氯化钙和Inoue法,经验就是
1.氯化钙和Inoue要过滤灭菌,期间烧杯、容量瓶、勺子、注射器、量筒、纯水都要灭菌干燥后使用。保证什么都是干净的。
2.菌不能摇过了,大约0.3-0.5就可以了
3.我都是先分装菌,然后在做感受态的
4.在超净台工作,如果那段时间大家在做其他的基因克隆,做过连接和转化的话,我会选个另外的时间做。
5.氯化钙法,我都是当天摇菌当天做,Inoue法,都是过夜低温摇
6做好感受态,要在无抗和有抗的固体培养基上培养,以保证感受态没有被污染
7.感受态最好在三个月内用完
9楼2012-05-03 08:40:20
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢帮助!! 2012-04-24 17:51:14
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-24 18:39:23
照着分子生物学的书上CaCl2法做就行了。主要是操作的时候注意低温,一般都没有问题的。
2楼2012-04-24 16:35:32
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to-be

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+4, 很有帮助 2012-04-24 20:09:27
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-04-24 20:16:18
我们经验是;
1.开始摇菌不要过了,宁可获得的菌体少,也不要太浓了。
2.停止生长要迅速,在冰上越快越好。
3.中间系的过程中一定要防止污染,防止冰滴或溅入菌体中。
4.做好要迅速液氮冷冻,-80度保存。
5.快速使用(2-3个月内),自己做的感受态放置过久效果很不好。
3楼2012-04-24 19:29:25
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rhguo

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没有自己做过,不过好像用试剂盒会快很多
4楼2012-04-25 19:47:10
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