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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)


[交流] 求各位大神交流感受态制作心得

最近用TSS法做的大肠杆菌感受态一直不好,很好奇传说中的10的八次方的效率是如何做出来的,特请各位大神交流一下经验,当然不仅限于TSS法~~~
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ixido

木虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+2, 谢谢交流 2012-04-27 10:55:24
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-27 13:43:33
有一个传说中的hanaha法,可以做到很高,但是实验室里没有人成功实践出来。楼主只要按照分子克隆指南上的指导认真做就可以了,一般转化,甚至共转两个质粒都没有问题。
保持整个过程的低温是最重要的。
6楼2012-04-27 10:24:28
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+1, 谢谢帮助!! 2012-04-24 17:51:14
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-24 18:39:23
照着分子生物学的书上CaCl2法做就行了。主要是操作的时候注意低温,一般都没有问题的。
2楼2012-04-24 16:35:32
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to-be

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
liuyu_sdili: 金币+4, 很有帮助 2012-04-24 20:09:27
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-04-24 20:16:18
我们经验是;
1.开始摇菌不要过了,宁可获得的菌体少,也不要太浓了。
2.停止生长要迅速,在冰上越快越好。
3.中间系的过程中一定要防止污染,防止冰滴或溅入菌体中。
4.做好要迅速液氮冷冻,-80度保存。
5.快速使用(2-3个月内),自己做的感受态放置过久效果很不好。
3楼2012-04-24 19:29:25
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rhguo

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没有自己做过,不过好像用试剂盒会快很多
4楼2012-04-25 19:47:10
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