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fanglove0o0

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[求助] 酶偶联法测酶活力，怎么计算啊

酶偶联方法测某种酶的活力，偶联了NADH的消耗，1U定义为每分钟消耗1umolNADH，有计算公式吗？酶量是200ul体系中加入20ug酶，求高手指点。。。。。急急急！！！！！

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1楼 2012-04-22 21:38:56

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凌波丽

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fanglove0o0: 金币+2, ★有帮助 2012-04-23 20:41:26

NADH的消耗不难测定呀，NADH的浓度的分光光度测定在340纳米处进行。我昨天上午正好和别人讨论一种NADH的浓度的分光光度测定酯酶和脂肪酶检测的题目，我在上来时（最迟本周六）把SCI原始论文发上来，你按照SCI原始论文中的实验流程做起来。你可以把这问题的链接用站内信件发给我，以便我能够方便的找到。

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2楼2012-04-23 00:42:57

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凌波丽

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【答案】应助回帖

论文来了，有公式，请假附件。

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附件 1 : 20084392717141.pdf

2012-04-23 11:48:31, 256.36 K

3楼2012-04-23 11:48:41

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nieqin138220

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我买过一个试剂盒里面有计算公式，你看看:
酶活力（U/g）= (△A/6.22 )× ( Vt/Vs ) ÷反应时间÷比色光径 ÷匀浆蛋白含量
6.22：NADH的毫摩尔吸光系数
△A：两次OD值之差
( Vt/Vs ) ：反应体系中样品稀释倍数
匀浆蛋白含量:g/ml

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不抛弃理想，不放弃努力

4楼2012-04-23 13:17:25

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-23 00:42:57:
NADH的消耗不难测定呀，NADH的浓度的分光光度测定在340纳米处进行。我昨天上午正好和别人讨论一种NADH的浓度的分光光度测定酯酶和脂肪酶检测的题目，我在上来时（最迟本周六）把SCI原始论文发上来，你按照SCI原始 ...

看了文章再讨论。。先谢过了~~~~

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5楼2012-04-23 20:43:29

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凌波丽

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一些Enzyme-coupled assays相关的SCI文献。

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附件 1 : A probe for NADH and H2O2 amperometric detection at low applied potential for oxidase and dehydrogenase based biosensor applications-BB(2007) .pdf

2012-04-24 23:11:32, 366.39 K

附件 2 : A versatile colony assay based on NADH fluorescence -JMC(2006).pdf

2012-04-24 23:11:56, 386.66 K

附件 3 : Science-2011-NADH-coupled microplate photometric assay for kinetic studies of ATP-hydrolyzing enzymes with low and high specific activities.pdf

2012-04-24 23:12:21, 1.01 M

附件 4 : NADH-coupled microplate photometric assay for kinetic studies of ATP-hydrolyzing enzymes with low and high specific activities-AB(2003).pdf

2012-04-24 23:12:38, 256.09 K

附件 5 : An NADH-tetrazolium-coupled sensitive assay for malate dehydrogenase in mitochondria and crude tissue homogenates -J-Biochem-Biophys-Methods(2006).pdf

2012-04-24 23:12:51, 178.62 K

附件 6 : Low potential detection of NADH with Prussian Blue bulk modified..SAB(2007).pdf

2012-04-24 23:13:08, 268.68 K

附件 7 : NADH-coupled microplate photometric assay for kinetic studies of ATP-hydrolyzing enzymes with low and high specific activities-AB(2003).pdf

2012-04-24 23:13:22, 256.09 K

附件 8 : A general fluorescence-based coupled assay for S-adenosylmethionine-dependent methyltransferases -BBRC(2005).pdf

2012-04-24 23:14:16, 229.92 K

附件 9 : A continuous kinetic assay for adenylation enzyme activity and inhibition -AB(2010).pdf

2012-04-24 23:14:46, 582.63 K

附件 10 : A coupled fluorescent assay for histone methyltransferases -AB(2005).pdf

2012-04-24 23:14:51, 267.19 K

6楼2012-04-24 23:15:07

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6楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-24 23:15:07:
一些Enzyme-coupled assays相关的SCI文献。

太感谢了！！！！！

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7楼2012-04-26 21:51:15

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推荐你本测定酶活力的参考书：B.施特尔马赫著，钱嘉源译，酶的测定方法，中国轻工业出版社，1992，书中有31种常见的酶的活力测定方法，每种酶又不止一种方法，更重要的是，每种测定方法都给出了完整的Protocols，而且都有酶活力测定公式，还附加每种酶的没活力具体测定实例，非常通俗易懂，但是我没有电子版。

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8楼2012-04-27 00:17:36

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fanglove0o0

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8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-27 00:17:36:
推荐你本测定酶活力的参考书：B.施特尔马赫著，钱嘉源译，酶的测定方法，中国轻工业出版社，1992，书中有31种常见的酶的活力测定方法，每种酶又不止一种方法，更重要的是，每种测定方法都给出了完整的Protocols ...

谢谢啊

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9楼2012-04-27 20:12:39

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mareone

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你好，NADH是线粒体呼吸链中能量产生的控制标记物。NADH 氧化还原状态对细胞内氧水平和组织内能量消耗非常敏感。MitoViewer线粒体观测仪能够提供由NADH荧光评价的活体细胞实时线粒体运转信息。而且有专业软件分析。如果你想进一步了解，请给我写email :yanming@nbl.com.cn

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欲善其工，必利其器。

10楼2012-05-07 13:35:48

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