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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测酶活中的缓冲液怎么配制
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fanxiaojuan

金虫 (小有名气)

[求助] 测酶活中的缓冲液怎么配制

0.1mol/LPh=4.8醋酸缓冲液，250mmol/LPH=3.0和50mmol/LPH=4.5的酒石酸溶液怎么配制？
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1楼2012-04-22 21:22:11
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回帖置顶 ( 共有2个 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fanxiaojuan: 金币+6, ★★★很有帮助, 很详细，非常感谢 2012-04-23 08:42:21
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, good 2012-04-23 10:32:56
我把过程给你整个讲一遍，下次你自己就会算了。

醋酸缓冲溶液的配法
公式pH=pKa+lg([AC-]/[HAC]) =4.8
HAC的pKa=4.75
代入得[AC-]/[HAC]=10^(0.05)=1.20
所以只要醋酸钠和醋酸的物质的量之比为1.20，即可。醋酸根（包括解离和未解离的）的总摩尔浓度0.1mol/L，其中[AC-]占0.1mol/L的54%，[HAC]占0.1mol/L的46%。
如果要配100mL的醋酸缓冲溶液，则需要NaAc(3H2O)  0.1X54%X0.1mol, 即0.0054mol，需要冰醋酸0.1X46%X0.1mol, 即0.0046mol，
事先配好1 mol/L 的NaAc(3H2O)溶液和1 mol/L的 HAc溶液（由冰醋酸加蒸馏水配成），则取
1 mol/L  NaAc  溶液5.4(mL)，0.0054 mol，
1 mol/L  HAc  溶液4.6 (mL)，0.0046mol，
一起混匀，然后加蒸馏水稀释到100mL.
（NaAc•3H2O分子量＝136.09）
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4楼2012-04-22 23:43:16
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 好厉害啊~我可算不来，呵呵…… 2012-04-24 23:21:07
补充一点：缓冲溶液的配制方法小结：
1.用Henderson-Hasselbalch方程，pH=pKa+lg[C(HA-)/C(H2A)]，
算出共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的比例（摩尔数比例）。
2.对于多元弱酸，用Henderson-Hasselbalch方程，共轭酸变为共轭碱永远只取一级电离，也就是共轭碱(HA-)永远只带一个负电荷，因为二级解离要在一级解离的基础上，一般不必考虑。
3.对于多元弱酸，用Henderson-Hasselbalch方程，pKa永远取pKa1。
4.配制时比较简单的完整操作办法：将共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的总量定为1摩尔，并且共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的比例加以换算，是固体则换算成质量，是液体按其占有摩尔比换算成体积。
举例：以第三题为例
“250mmol/L的PH=4.5的酒石酸缓冲溶液的配制方法：
pH=pKa1+lg[C(HA-)/C(H2A)]
4.5=3.04+lg[C(HA-)/C(H2A)]
lg[C(HA-)/C(H2A)]=1.46
[C(HA-)/C(H2A)]=28.8403
也就是[C(HA-)/C(H2A)]=29/1，即配制时取【酒石酸钠的物质的量(摩尔数)】/【 酒石酸的物质的量(摩尔数)】=29/1.”
酒石酸钠的物质的量(摩尔数)+酒石酸的物质的量(摩尔数)=1mol溶质，
这1mol溶质中酒石酸钠的物质的量(摩尔数)是29/30mol，用29/30mol X “酒石酸钠的分子量”=所要的酒石酸钠的质量。
酒石酸是液体，我们用在1mol 溶质中: 酒石酸的物质的量(摩尔数)-----也就是：1/30mol/“酒石酸溶液的摩尔浓度”=酒石酸所需的体积。“酒石酸溶液的摩尔浓度"是指你们实验室的现货酒石酸溶液的摩尔浓度，当然要比最终缓冲溶液浓度大，不然还要先浓缩。

这样，1mol溶质中酒石酸钠和酒石酸就凑齐了，先把两者都放进1L的烧杯中，然后向里注蒸馏水直到总体积到达1L或略少，搅拌均匀，测定PH，可往里面加极少量的酒石酸钠或酒石酸把PH值跳到4.5. 如此，你就有了1L的1mol/L的PH=4.5酒石酸缓冲溶液，然后再稀释到250mmol/L，稀释过程不影响pH值。除非无限稀释，因为那时就要考虑的水的pKa了。
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11楼2012-04-24 22:41:46
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fanxiaojuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-23 00:20:38:
酒石酸是二元酸，但是解离时基本上只考虑一级解离即可，也是用Henderson-Hasselbalch方程，就是我上面用的方程，这个贴你可以参考：
http://muchong.com/html/200807/900807.html。

在想具体些，可以看：I.H.Se ...

这个还是不怎么会算，而且时间很紧，能不能直接告诉我PH=3和PH=4.5的酒石酸根和酒石酸的比例哦，还有怎么知道各占的比例，就像上贴中的【[AC-]占0.1mol/L的54%，[HAC]占0.1mol/L的46%】，谢谢啊
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6楼2012-04-23 08:47:44
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 应助指数+1, Good！ 2012-04-24 11:42:51
书已经上传了，有关缓冲溶液配制在该书第一章。

I.H.Segel,Biochemical Calculations,Wily,1976,2nd edition,英文原版。不仅对于学习生物化学有价值，对于实验工作也有价值，比如缓冲溶液配制和分光光度计算等。欢迎下载。http://ishare.iask.sina.com.cn/f/24097527.html
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8楼2012-04-23 22:35:28
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fanglove0o0

金虫 (小有名气)
是做酶活力的吗？交流交流啊
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2楼2012-04-22 21:26:29
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fanxiaojuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fanglove0o0 at 2012-04-22 21:26:29:
是做酶活力的吗？交流交流啊

是测酶活啊，你测得什么酶？
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3楼2012-04-22 21:33:02
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-23 22:03:42
酒石酸是二元酸，但是解离时基本上只考虑一级解离即可，也是用Henderson-Hasselbalch方程，就是我上面用的方程，这个贴你可以参考：
http://muchong.com/html/200807/900807.html。

在想具体些，可以看：I.H.Segel 编，吴经才、张光兴、静天玉 等 译，生物化学计算，科学出版社，1983，第27-52页。我有该书的英文版电子版，LZ需要，我改日发上来。
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5楼2012-04-23 00:20:38
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by fanxiaojuan at 2012-04-23 08:47:44:
这个还是不怎么会算，而且时间很紧，能不能直接告诉我PH=3和PH=4.5的酒石酸根和酒石酸的比例哦，还有怎么知道各占的比例，就像上贴中的【占0.1mol/L的54%，占0.1mol/L的46%】，谢谢啊

今天有事，下次再答，请把此贴连接用站内信件发给我。
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7楼2012-04-23 11:51:09
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凌波丽

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励热心应助！ 2012-04-24 11:43:20
fanxiaojuan: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 懂了，谢谢俩字已经表达不出我的感激之情了，谢谢 2012-04-24 11:55:23
250mmol/LPH=3.0和50mmol/LPH=4.5的酒石酸溶液怎么配制？

回答：
酒石酸是二元酸，但是解离时基本上只考虑一级解离即可，也是用Henderson-Hasselbalch方程，
1）PH=3的250mmol/L的酒石酸缓冲溶液的配制方法：
d-酒石酸，pKa1=3.04；pKa2=4.37.
pH=pKa1+lg[C(HA-)/C(H2A)]
3=3.04+lg[C(HA-)/C(H2A)]
lg[C(HA-)/C(H2A)]=-0.04
[C(H2A)/C(HA-)]=10^(0.04)=1.0964，
这也就是说只要是同样摩尔浓度的酒石酸溶液和酒石酸钠溶液 按等体积混溶就成为PH=3，你既然要250mmol/L的酒石酸缓冲溶液，那就先配出250mmol/L的酒石酸溶液和250mmol/L的酒石酸钠溶液等体积混溶均匀即可成为PH=3的250mmol/L的酒石酸缓冲溶液。明白了吗？

2）250mmol/L的PH=4.5的酒石酸缓冲溶液的配制方法：
pH=pKa1+lg[C(HA-)/C(H2A)]
4.5=3.04+lg[C(HA-)/C(H2A)]
lg[C(HA-)/C(H2A)]=1.46
[C(HA-)/C(H2A)]=28.8403
也就是[C(HA-)/C(H2A)]=29/1，即配制时取【酒石酸钠的物质的量(摩尔数)】/【 酒石酸的物质的量(摩尔数)】=29/1.看懂了吗？
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9楼2012-04-23 23:39:47
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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西瓜: , 有道理 2012-04-24 23:19:12
缓冲溶液很好计算，能直接查的当然好，但是不可能什么都查得到，还是要学会去算，这很有用。无论楼主还是其他网友都可以和我讨论缓冲溶液的配制，如果大家与我都方便的话。
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10楼2012-04-23 23:43:05
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