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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测酶活中的缓冲液怎么配制
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 好厉害啊~我可算不来，呵呵…… 2012-04-24 23:21:07
补充一点：缓冲溶液的配制方法小结：
1.用Henderson-Hasselbalch方程，pH=pKa+lg[C(HA-)/C(H2A)]，
算出共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的比例（摩尔数比例）。
2.对于多元弱酸，用Henderson-Hasselbalch方程，共轭酸变为共轭碱永远只取一级电离，也就是共轭碱(HA-)永远只带一个负电荷，因为二级解离要在一级解离的基础上，一般不必考虑。
3.对于多元弱酸，用Henderson-Hasselbalch方程，pKa永远取pKa1。
4.配制时比较简单的完整操作办法：将共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的总量定为1摩尔，并且共轭碱(HA-)与共轭酸(H2A)的物质的量的比例加以换算，是固体则换算成质量，是液体按其占有摩尔比换算成体积。
举例：以第三题为例
“250mmol/L的PH=4.5的酒石酸缓冲溶液的配制方法：
pH=pKa1+lg[C(HA-)/C(H2A)]
4.5=3.04+lg[C(HA-)/C(H2A)]
lg[C(HA-)/C(H2A)]=1.46
[C(HA-)/C(H2A)]=28.8403
也就是[C(HA-)/C(H2A)]=29/1，即配制时取【酒石酸钠的物质的量(摩尔数)】/【 酒石酸的物质的量(摩尔数)】=29/1.”
酒石酸钠的物质的量(摩尔数)+酒石酸的物质的量(摩尔数)=1mol溶质，
这1mol溶质中酒石酸钠的物质的量(摩尔数)是29/30mol，用29/30mol X “酒石酸钠的分子量”=所要的酒石酸钠的质量。
酒石酸是液体，我们用在1mol 溶质中: 酒石酸的物质的量(摩尔数)-----也就是：1/30mol/“酒石酸溶液的摩尔浓度”=酒石酸所需的体积。“酒石酸溶液的摩尔浓度"是指你们实验室的现货酒石酸溶液的摩尔浓度，当然要比最终缓冲溶液浓度大，不然还要先浓缩。

这样，1mol溶质中酒石酸钠和酒石酸就凑齐了，先把两者都放进1L的烧杯中，然后向里注蒸馏水直到总体积到达1L或略少，搅拌均匀，测定PH，可往里面加极少量的酒石酸钠或酒石酸把PH值跳到4.5. 如此，你就有了1L的1mol/L的PH=4.5酒石酸缓冲溶液，然后再稀释到250mmol/L，稀释过程不影响pH值。除非无限稀释，因为那时就要考虑的水的pKa了。
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11楼2012-04-24 22:41:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

当然，按250mmol溶质算酒石酸钠和酒石酸的用量，然后加蒸馏水定容至1L，不再稀释也可以。
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12楼2012-04-24 22:49:50
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