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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增曲线不平滑是怎么回事？
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可帅儿

银虫 (正式写手)

[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。
配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。










这是4个重复的反应，用的是50ul体系












这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好



[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]
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1楼 2012-04-17 15:30:17
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-05-07 13:57:15
引用回帖:
40楼: Originally posted by txw87 at 2012-05-06 22:54:46:
额，ROX一般应该不是直接加入的吧。

因为除了ABI的仪器，其他仪器是不用ROX的，如果直接加入了，会影响实验结果吧；还有ABI 7300和7500用的也不是同一种ROX，难道要分出不同机型的Mix？

我也是个人看法，因 ...

嗯......................
       我用过TOYOBO和Invitrogen公司两种Mix 均是直接加入的，TOYOBO产品没有直接注明 Invitrogen公司会写含ROX的XXXXX让人一目了然，并非是ABI的用而其他仪器不用，据我所知大多数仪器都支持ROX，反之则是Roche的LightCycler和Bio-Rad的部分仪器（好像是IQ系列吧）不支持ROX矫正。
       没有用过ABI7300/7500所以不知道多种ROX情况 若你有详细情报，还烦请告知，偶比较感兴趣
       个人看法 有说错的话请指点
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41楼2012-05-06 23:48:11
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可帅儿

银虫 (正式写手)
哎~~自己来顶顶！求大神指点(⊙o⊙)哦
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2楼2012-04-19 13:44:05
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-04-19 17:27:17
首先我认为扩增曲线不光滑可能时因为还在基线期，其次，你要加溶解曲线的话可以在experiment menu的experiment properties里面选择检测试剂SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打钩，第三，工作液可以先mix再分到每个孔里，cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]
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3楼2012-04-19 15:53:18
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-19 17:26:48
嗯...........
感觉体系过大了哦，100uL体系完全没有必要的，同时你用的什么MasterMix呢，还有感觉前面几个图不是不平滑，而是没有起峰呢
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可帅儿
4楼2012-04-19 16:19:06
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