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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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可帅儿

银虫 (正式写手)


[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事?

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR,最后的结果是大致的曲线走向都对的,就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因?
P.S.我用的是ABI7500做的,想同时做出扩增曲线和溶解曲线,请问有木有熟悉仪器的大虾,应该怎么setup才行呢?貌似实验type只能是一种。。。
配工作液还不太熟练,我怕配错;于是想一管一管加,这样至少不会有差错。










这是4个重复的反应,用的是50ul体系












这也是4个重复的,但是100ul体系,貌似效果比50 的好



[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]
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txw87

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
38楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-06 21:14:41:
大姐啊
幸亏回来看到这帮人在这说了
你应该看看试剂说明书的 ROX染料一般都是直接加入的
我用的TOYOBO Mix就是这样的
你可以看看试剂盒里哪里有什么额外的ROX让你加的啦...........
如果你的Mix是呈现 ...

额,ROX一般应该不是直接加入的吧。

因为除了ABI的仪器,其他仪器是不用ROX的,如果直接加入了,会影响实验结果吧;还有ABI 7300和7500用的也不是同一种ROX,难道要分出不同机型的Mix?

我也是个人看法,因为没用过很多种Mix。

我比较认同你这句话:“如果你的Mix是呈现微微一点红色的话 本身就说明有ROX染料的啦”
40楼2012-05-06 22:54:46
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可帅儿

银虫 (正式写手)


哎~~自己来顶顶!求大神指点(⊙o⊙)哦
2楼2012-04-19 13:44:05
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chlorella409

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, Good! 2012-04-19 17:27:17
首先我认为扩增曲线不光滑可能时因为还在基线期,其次,你要加溶解曲线的话可以在experiment menu的experiment properties里面选择检测试剂SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打钩,第三,工作液可以先mix再分到每个孔里,cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]
3楼2012-04-19 15:53:18
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atlanticwi

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good! 2012-04-19 17:26:48
嗯...........
感觉体系过大了哦,100uL体系完全没有必要的,同时你用的什么MasterMix呢,还有感觉前面几个图不是不平滑,而是没有起峰呢

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4楼2012-04-19 16:19:06
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