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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增曲线不平滑是怎么回事？
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可帅儿

银虫 (正式写手)

[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。
配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。










这是4个重复的反应，用的是50ul体系












这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好



[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]
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1楼 2012-04-17 15:30:17
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-04-22 19:11:17
引用回帖:
21楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-21 22:21:05:
呵呵是么这个试剂公司不出名么不清楚哎。。。
有考虑到试剂不太适合机器这个原因
谢谢指点！

嗯..................
ABI的东西固然好，但也不用担心
东洋纺(TOYOBO)的东西也是不错的，一大堆人用他的KOD用的那么带劲的.................没有说试剂不适合机器这种说法，除非那个公司很邪恶的就把自己的产品优化到最好，但通常我觉得不会有这个问题，再说SYBR Green及TaqMan都不是ABI或TOYOBO公司的特有商标，作为Molecular Probes公司的专利，不会说其他公司就使用的不一样哦，虽然Molecular Probes和ABI现在是一个Life Technologies旗下的...................
所以实验的问题基本不会是正牌公司的产品问题 除非你拿到的就是假货，尽量还是优化实验条件吧
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22楼2012-04-22 13:04:32
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可帅儿

银虫 (正式写手)
哎~~自己来顶顶！求大神指点(⊙o⊙)哦
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2楼2012-04-19 13:44:05
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-04-19 17:27:17
首先我认为扩增曲线不光滑可能时因为还在基线期，其次，你要加溶解曲线的话可以在experiment menu的experiment properties里面选择检测试剂SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打钩，第三，工作液可以先mix再分到每个孔里，cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]
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3楼2012-04-19 15:53:18
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-19 17:26:48
嗯...........
感觉体系过大了哦，100uL体系完全没有必要的，同时你用的什么MasterMix呢，还有感觉前面几个图不是不平滑，而是没有起峰呢
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可帅儿
4楼2012-04-19 16:19:06
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