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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增曲线不平滑是怎么回事？
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可帅儿

银虫 (正式写手)

[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。
配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。










这是4个重复的反应，用的是50ul体系












这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好



[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]
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1楼 2012-04-17 15:30:17
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
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4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-19 16:19:06:
嗯...........
感觉体系过大了哦，100uL体系完全没有必要的，同时你用的什么MasterMix呢，还有感觉前面几个图不是不平滑，而是没有起峰呢

同意~我们才用10uL，钱多的实验室也才用20uL。那玩意可不便宜哦。
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7楼2012-04-19 17:26:40
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-23 16:02:08:
谢谢专家指点！！！
我也觉得有些客观条件应该不会有大碍，但是每次实验结果都不尽人意，看来还是我资质不够好吧。
还想请教一下，抽提好的DNA测定OD值的时候，是不是只有在260nm有吸收峰才正常？我的吸收峰 ...

你的吸收峰低于220nm，可能就是DNA浓度太低啦，背景的信号相对强了些。
你是什么DNA？10ng/uL实在太少啦。
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可帅儿
24楼2012-04-23 18:43:39
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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引用回帖:
25楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-23 20:07:42:
样本的血迹样本，是人类基因组样本。我也觉得太低了。
但是试剂盒说明书上写了最后得到的DNA浓度大约为1ng/ul，这算正常吗？

额，那应该没太大问题吧。不过个人还是觉得偏低了些。
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26楼2012-04-23 21:54:40
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