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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 电化学 » 电分析测试 » SDS电泳的时候，样品上BUFF后煮沸3分钟变性，时间过长或过短有硬性要求吗？
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danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] SDS电泳的时候，样品上BUFF后煮沸3分钟变性，时间过长或过短有硬性要求吗？

加热后是否需要短暂离心，离心多久，作用是什么？

所有样品都一视同仁吗?
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1楼 2012-04-12 20:37:29
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gaobingmiao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
seagrove: 金币+2, 鼓励新虫多多交流~ 2012-04-12 22:46:36
一般情况下煮5分钟就可以了 建议不要超过10分钟，时间太长蛋白煮化掉了，时间也不应少于3分钟，要不变性的不好，也跑不出好的条带。加热后离心的作用是去掉不溶的物质，正常情况下可以不离心，有些时间比如直接拿菌液煮后还是最好离心一下 去掉不容的杂质！
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2楼2012-04-12 21:48:17
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yjchsh

铁杆木虫 (正式写手)

Dr.
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaobingmiao at 2012-04-12 21:48:17:
一般情况下煮5分钟就可以了 建议不要超过10分钟，时间太长蛋白煮化掉了，时间也不应少于3分钟，要不变性的不好，也跑不出好的条带。加热后离心的作用是去掉不溶的物质，正常情况下可以不离心，有些时间比如直接拿 ...

时间太长蛋白煮化掉了???
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3楼2012-04-13 08:13:56
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s_cope

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意一楼的观点   嘿嘿
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4楼2012-04-13 09:44:17
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室一般都是煮蛋白8分钟，然后12000rpm离心1分钟，抛出的条带很漂亮
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
5楼2012-04-13 21:44:09
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lixingliang at 2012-04-13 21:44:09:
我们实验室一般都是煮蛋白8分钟，然后12000rpm离心1分钟，抛出的条带很漂亮

12000RPM是单纯的1分钟还是机器转速达到12000RPM之前的时间也计算？
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6楼2012-04-13 23:38:01
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zhsteel

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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看情况了,有时不超过10秒, 因为有些蛋白加热后就看不见了
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只要方便虫子们就好，怎么帮助是次要的吧
7楼2012-04-16 01:22:12
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yjchsh

铁杆木虫 (正式写手)

Dr.

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
After your heating and quickly cool on ice for few minutes.
And then vortex to let your samples homogenous.
5000 rpm centrifuge 1min.

I think the heating will make some water in samples become vapor and stay on the lid and wall of the centrifuge tube.
The function of the centrifuge is to get the water back into your samples. So you don't loose anything.

Good luck with your experiments.
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8楼2012-04-18 01:26:22
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhsteel at 2012-04-16 01:22:12:
看情况了,有时不超过10秒, 因为有些蛋白加热后就看不见了

动物血里的蛋白呢？
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9楼2012-04-18 20:27:58
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhsteel at 2012-04-16 01:22:12:
看情况了,有时不超过10秒, 因为有些蛋白加热后就看不见了

都有哪些蛋白加热后看不见？
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10楼2012-04-21 09:35:46
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