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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 多肽纯化问题
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saltrong

木虫 (正式写手)

[求助] 多肽纯化问题 已有2人参与

我做的是酶解多肽，经分离纯化后，在高效液相乙腈和水梯度洗脱为单一峰形时收集做了氨基酸序列测试，后来又做了一级质谱，但是质谱结果显示有多个组分的分子量且不是序列测试结果中的任何一个，cry:我想知道，出现这样的结果可能是什么原因啊，拜托各位高手帮我分析一下吧:
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1楼 2012-04-10 19:26:22
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zxg_4545

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个每个步骤都会出现问题啊，肽段本来就不稳定，一步一步排除吧，先把酶切后的样品鉴定，看看能否找到你想要的肽段，如果没有，接下来的也不用做了。
如果有，收集过程中用的是制备液相？还是普通的HPLC，如果是HPLC本来一次收集的量就少，多次收集又会导致肽段变性的问题。
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5楼2015-04-09 08:35:48
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yuanyang415

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
液相是用反相柱跑的吗？这本来就是按照极性来分离的，可以试试液质联用看看
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2楼2012-04-15 23:57:31
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sunie_2011

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

呵呵，应该时你做质谱是气化实温度过高导致样品分解，我原来也遇到过这样问题，自己检不知道是什么，外检就只有一个峰，后来咨询才是自己质谱参数有问题。
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努力生活！
3楼2012-06-08 09:04:16
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liu2011410

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

洗脱过程只有单一的峰形，酶解条件过程是否出问题了，可能还有很小的峰不易察觉的没有收集到！
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4楼2015-04-08 19:33:55
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