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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 做过多糖除蛋白的请进
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七AND七

银虫 (小有名气)

[交流] 做过多糖除蛋白的请进 已有17人参与

最近在做海藻多糖的结构分析，其中要对粗多糖除蛋白，选择Sevag方法，但是发现重复了几次之后再加Sevag试剂剧烈振摇后还是呈乳白色状态，分液漏斗没办法分离只能高速离心才能分离而且还发现水层越来越少了……请问这是什么原因？我都怀疑那些是不是都是糖蛋白而没有多糖啊！除蛋白时多糖液浓度是不是应该烯一点有利于蛋白的出去？或者还有什么更有效率的方法？
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1楼 2012-04-02 18:13:19
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guoheizi

木虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by 七AND七 at 2012-04-05 19:09:26:
你好！加了Sevag试剂后是用搅拌子搅拌么 不用在分液漏斗中剧烈振摇么？我振摇了之后呈白色状态，我想是乳化了。然后我又去离心看看，结果就只有两层（上层多糖，下层就全部是白色的）没看到所谓的变性蛋白。搅拌 ...

你初次除蛋白时蛋白的含量会相对较多，即使你离心了也会看到氯仿层会是黏黏的，等到你除几次以后渐渐的变性蛋白就少了 就会在离心完后看到薄薄的一层白色粘稠物质。加水饱和正丁醇就是为了防止乳化的。建议你氯仿和水饱和正丁醇4:1 然后糖溶液和有机相体积比1:1 在最初除蛋白的几次可以用磁力搅拌器之类的 等到搅拌三四次以后换手动摇瓶。这样省力气啊孩子。呵呵
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12楼2012-04-08 00:32:42
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jj_ws

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by wonder1986 at 2012-04-05 09:59:21
有机溶剂是在下层吗？我用sevag试剂怎么是有机溶剂在上层啊~~...

亲，请问下你做的时候有机相是透明的吗？我的有机相呈淡黄色？我多糖的颜色是淡黄色，想问一下有机相是不是含多糖啊？
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cherry-cherish
15楼2012-07-17 15:35:17
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liu200479

木虫 (正式写手)
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leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-04-03 08:02:33
首先要把多糖溶解了，如果不报多糖溶解了，在离心时多糖会沉淀
再加Sevag试剂剧烈振摇后还是呈乳白色状态，这是乳化现象，可以冷冻破乳，
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2楼2012-04-02 22:59:31
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七AND七

银虫 (小有名气)
我是把多糖全部溶解了的，还有就是我看文献上说加了Sevag试剂后振摇完了会分成三层，上层多糖 下层有机试剂 中间白色层为变性蛋白质。为什么我离心完就只有两层呢，上层是多糖 下层是全部白白的 ，难道我的多糖里的蛋白含量很高？不解
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3楼2012-04-03 09:54:14
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liu200479

木虫 (正式写手)
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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-04 22:09:03
中间层没有可能代表没有变性蛋白了，下层冷冻后再看看，可能是变形蛋白，还可能是乳化，还可能含有化合物
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4楼2012-04-03 11:52:36
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七AND七

银虫 (小有名气)
谢谢！现在我也觉得应该是那白色的下层因该是由于乳化导致的通过离心就全部被拖到了下层，之前也在纳闷为什么有机层都全部成了白色 还以为蛋白含量太多了呢……看来现在最要紧的还是破乳先
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5楼2012-04-03 16:15:48
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guoheizi

木虫 (小有名气)
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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-04 22:09:08
加一定比例的水饱和正丁醇。试试效果
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6楼2012-04-04 21:59:04
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wonder1986

铜虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by 七AND七 at 2012-04-03 09:54:14:
我是把多糖全部溶解了的，还有就是我看文献上说加了Sevag试剂后振摇完了会分成三层，上层多糖 下层有机试剂 中间白色层为变性蛋白质。为什么我离心完就只有两层呢，上层是多糖 下层是全部白白的 ，难道我的多糖里 ...

有机溶剂是在下层吗？我用sevag试剂怎么是有机溶剂在上层啊~~
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jj_ws
临渊羡鱼，不如退而结网
7楼2012-04-05 09:59:21
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zcczj

铜虫 (正式写手)
★
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-04-08 09:22:57
氯仿在下层的
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慢慢的……
8楼2012-04-05 16:16:28
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zhxl81920

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2012-04-05 17:19:21
氯仿和正丁醇的比例，以及与多糖的比例，搅拌大概30min后分液漏斗静置一段时间，中间的是变形的蛋白层分液可以除去。或者用酶处理后透析，也有有三氯乙酸的，可以试试你的样品那个比较合适。
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又是美好的一天
9楼2012-04-05 17:04:08
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七AND七

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhxl81920 at 2012-04-05 17:04:08:
氯仿和正丁醇的比例，以及与多糖的比例，搅拌大概30min后分液漏斗静置一段时间，中间的是变形的蛋白层分液可以除去。或者用酶处理后透析，也有有三氯乙酸的，可以试试你的样品那个比较合适。

你好！加了Sevag试剂后是用搅拌子搅拌么 不用在分液漏斗中剧烈振摇么？我振摇了之后呈白色状态，我想是乳化了。然后我又去离心看看，结果就只有两层（上层多糖，下层就全部是白色的）没看到所谓的变性蛋白。搅拌时间一定要很长么？我差不多就一两分钟。酶解后可以直接透析能除掉蛋白么？
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10楼2012-04-05 19:09:26
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