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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 做过多糖除蛋白的请进
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七AND七

银虫 (小有名气)

[交流] 做过多糖除蛋白的请进 已有17人参与

最近在做海藻多糖的结构分析，其中要对粗多糖除蛋白，选择Sevag方法，但是发现重复了几次之后再加Sevag试剂剧烈振摇后还是呈乳白色状态，分液漏斗没办法分离只能高速离心才能分离而且还发现水层越来越少了……请问这是什么原因？我都怀疑那些是不是都是糖蛋白而没有多糖啊！除蛋白时多糖液浓度是不是应该烯一点有利于蛋白的出去？或者还有什么更有效率的方法？
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1楼 2012-04-02 18:13:19
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guoheizi

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 七AND七 at 2012-04-05 19:09:26:
你好！加了Sevag试剂后是用搅拌子搅拌么 不用在分液漏斗中剧烈振摇么？我振摇了之后呈白色状态，我想是乳化了。然后我又去离心看看，结果就只有两层（上层多糖，下层就全部是白色的）没看到所谓的变性蛋白。搅拌 ...

你初次除蛋白时蛋白的含量会相对较多，即使你离心了也会看到氯仿层会是黏黏的，等到你除几次以后渐渐的变性蛋白就少了 就会在离心完后看到薄薄的一层白色粘稠物质。加水饱和正丁醇就是为了防止乳化的。建议你氯仿和水饱和正丁醇4:1 然后糖溶液和有机相体积比1:1 在最初除蛋白的几次可以用磁力搅拌器之类的 等到搅拌三四次以后换手动摇瓶。这样省力气啊孩子。呵呵
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12楼2012-04-08 00:32:42
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liu200479

木虫 (正式写手)
★ ★
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leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-04-03 08:02:33
首先要把多糖溶解了，如果不报多糖溶解了，在离心时多糖会沉淀
再加Sevag试剂剧烈振摇后还是呈乳白色状态，这是乳化现象，可以冷冻破乳，
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2楼2012-04-02 22:59:31
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七AND七

银虫 (小有名气)
我是把多糖全部溶解了的，还有就是我看文献上说加了Sevag试剂后振摇完了会分成三层，上层多糖 下层有机试剂 中间白色层为变性蛋白质。为什么我离心完就只有两层呢，上层是多糖 下层是全部白白的 ，难道我的多糖里的蛋白含量很高？不解
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3楼2012-04-03 09:54:14
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liu200479

木虫 (正式写手)
★ ★
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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-04 22:09:03
中间层没有可能代表没有变性蛋白了，下层冷冻后再看看，可能是变形蛋白，还可能是乳化，还可能含有化合物
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4楼2012-04-03 11:52:36
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