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tawnya

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于PCR中buffer的更换问题

巢式PCR
最开始的时候均用10×Buffer跑PCR，做了很多有极少的条带被扩增出来了
后来换用：第一次PCR用GC Buffer1，第二次仍然用10×Buffer，有一半的条带被扩增出来（相同条件条带明显更加明亮）
今天把没有扩增出的模板拿出来，两次都用GC Buffer1，可以见到影影约约的目的条带

请问这是什么原因？我是不是还要更换GC buffer2试试？需不需要更换引物？

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1楼2012-03-29 21:47:23

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tawnya

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引用回帖:

2楼: Originally posted by changes at 2012-03-29 22:03:35:
1.普通buffer没有扩增出产物的模板，可能是模板质量不好或浓度不合适。可以重提模板或调整模板浓度。
2.GC buffer2和GC buffer1两种是针对不同模板的吧？
3.引物先不用换，看看最终结果再做决定吧。

1.说明书上说的是GC buffer1扩增不出就可以尝试使用GC buffer2
2.模板换过两次，应该没有太大的问题，而且除了换用buffer以外
，我所有的条件都是一样的，所以浓度温度影响可以排除在外。
别人要么就是纯粹跑不出，我这样的跑出一半，而且能够跑出来的这一半跑得还非常好，我还真没有见到有谁这样的。查了好多资料啊都找不出原因。
您的意见是建议我再用现在的引物？那么还需要调整一些什么呢？