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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大虾们帮忙看看3和4这两个蛋白用什么样的柱子填料能分开

求助,我在分离纯化蛋白的时候,過柱得到下面的图,3和4是有效抑菌蛋白所在地,怎么样可以把两种蛋白分开呢?
我用的是DEAE FF的填料先提纯了一下蛋白得到的下面的图,上样量是2ml,洗脱液是含有1mol/L Nacl 的Tris-Hcl 进行梯度洗脱,恒流泵速度是4
大虾们有没有什么填料可以分开相近的两种蛋白呢?、??或者不用DEAE FF,有没有其他更好的一些可以分开蛋白的方法??
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 专家考核, Good! 2012-03-28 10:53:04
看图就知道用什么填料能把蛋白分开那也太神奇了点。
现在用的离子交换不能很好分开,后续步骤就用疏水作用层析试试。
2楼2012-03-28 07:33:22
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chlorella409

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 10:53:22
没蛋白理化性质不好说啊,DEAE作为弱阴离子交换柱从图上看效果不怎么好,你还是选其他种类的柱子吧
3楼2012-03-28 09:12:54
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
假如不知道理化性质就多试几种柱子吧
4楼2012-03-28 09:39:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个只能试,不知道两种蛋白的分子量差别大不大,如果不大的话,可以考虑凝胶过滤。你最好把他们的分子量先测出来
5楼2012-03-28 18:10:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-29 17:36:44
上面错了,如果分子量差别大的话,可以用凝胶过滤
6楼2012-03-28 18:10:52
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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-28 18:10:52:
上面错了,如果分子量差别大的话,可以用凝胶过滤

跑过电泳了,两种分子量很接近,所以很困惑,不知道该用什么方法好
7楼2012-03-29 12:21:28
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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-03-28 09:12:54:
没蛋白理化性质不好说啊,DEAE作为弱阴离子交换柱从图上看效果不怎么好,你还是选其他种类的柱子吧

那可以推荐一下吗
8楼2012-03-29 12:22:08
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chlorella409

木虫 (正式写手)

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你能提供点这两个蛋白的信息么,不然不好判断啊
9楼2012-03-29 13:49:53
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

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tjhmt6131216: 回帖置顶 2012-04-09 19:55:37
引用回帖:
7楼: Originally posted by tjhmt6131216 at 2012-03-29 12:21:28:
跑过电泳了,两种分子量很接近,所以很困惑,不知道该用什么方法好

分子量很接近的话,只好考虑亲和活着疏水了
10楼2012-03-29 14:28:51
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