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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大虾们帮忙看看3和4这两个蛋白用什么样的柱子填料能分开
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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大虾们帮忙看看3和4这两个蛋白用什么样的柱子填料能分开

求助，我在分离纯化蛋白的时候，過柱得到下面的图，3和4是有效抑菌蛋白所在地，怎么样可以把两种蛋白分开呢？
我用的是DEAE FF的填料先提纯了一下蛋白得到的下面的图，上样量是2ml,洗脱液是含有1mol/L Nacl 的Tris-Hcl 进行梯度洗脱，恒流泵速度是4
大虾们有没有什么填料可以分开相近的两种蛋白呢？、？？或者不用DEAE FF，有没有其他更好的一些可以分开蛋白的方法？？
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1楼 2012-03-28 00:13:04
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回帖置顶 ( 共有1个 )

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

tjhmt6131216: 回帖置顶 2012-04-09 19:55:37
引用回帖:
7楼: Originally posted by tjhmt6131216 at 2012-03-29 12:21:28:
跑过电泳了，两种分子量很接近，所以很困惑，不知道该用什么方法好

分子量很接近的话，只好考虑亲和活着疏水了
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10楼2012-03-29 14:28:51
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 专家考核, Good！ 2012-03-28 10:53:04
看图就知道用什么填料能把蛋白分开那也太神奇了点。
现在用的离子交换不能很好分开，后续步骤就用疏水作用层析试试。
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2楼2012-03-28 07:33:22
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 10:53:22
没蛋白理化性质不好说啊，DEAE作为弱阴离子交换柱从图上看效果不怎么好，你还是选其他种类的柱子吧
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3楼2012-03-28 09:12:54
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
假如不知道理化性质就多试几种柱子吧
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4楼2012-03-28 09:39:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个只能试，不知道两种蛋白的分子量差别大不大，如果不大的话，可以考虑凝胶过滤。你最好把他们的分子量先测出来
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5楼2012-03-28 18:10:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-29 17:36:44
上面错了，如果分子量差别大的话，可以用凝胶过滤
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6楼2012-03-28 18:10:52
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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-28 18:10:52:
上面错了，如果分子量差别大的话，可以用凝胶过滤

跑过电泳了，两种分子量很接近，所以很困惑，不知道该用什么方法好
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7楼2012-03-29 12:21:28
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tjhmt6131216

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-03-28 09:12:54:
没蛋白理化性质不好说啊，DEAE作为弱阴离子交换柱从图上看效果不怎么好，你还是选其他种类的柱子吧

那可以推荐一下吗
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8楼2012-03-29 12:22:08
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你能提供点这两个蛋白的信息么，不然不好判断啊
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9楼2012-03-29 13:49:53
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