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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NcoⅠ酶切位点的设计问题
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lintaosong

木虫 (正式写手)

[求助] NcoⅠ酶切位点的设计问题

各位大虾：
我的基因开头序列为ATGTATT....我想在开头加上用NcoI（CCATGG）酶切位点，但我起始密码子后的密码子是TAT，我还想用NcoⅠ酶切位点的话，我应该怎么设计，谢谢！！！
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1楼 2012-03-26 22:30:01
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lintaosong at 2012-03-27 12:23:50:
第一种方法的话，对蛋白的影响大不？

一般情况影响不大，N/C端的氨基酸序列一般不在活性中心。
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5楼2012-03-27 13:42:33
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 学习了 2012-03-27 11:31:57
lintaosong: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-03-27 14:31:28
不管怎么改，ATG后面都不是TAT，也就是第二个氨基酸不是酪氨酸。其实也不用太纠结，一种方法直接把TAT改成GGC好了，这样第二个氨基酸变为甘氨酸，第三个氨基酸及后面的都不变；第二种方法是在ATG后面加三个碱基（GNN），后面是TAT，这样表达出来就是第二位多了一个氨基酸。
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2楼2012-03-27 07:52:40
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
CCATGG后面补上两个碱基保持GNN，这样你的基因就不会移码，NN选择和载体上NcoI后面的碱基一致，然后紧跟你的基因TATT，最终会多一个氨基酸，一般没什么影响。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-03-27 10:14:44
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lintaosong

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-03-27 07:52:40:
不管怎么改，ATG后面都不是TAT，也就是第二个氨基酸不是酪氨酸。其实也不用太纠结，一种方法直接把TAT改成GGC好了，这样第二个氨基酸变为甘氨酸，第三个氨基酸及后面的都不变；第二种方法是在ATG后面加三个碱基（ ...

第一种方法的话，对蛋白的影响大不？
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4楼2012-03-27 12:23:50
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