| 查看: 2797 | 回复: 7 | ||
[求助]
求助，为什么SSR扩增产物琼脂糖跑出的条带会比maker最大分子量还要大呢？？
|
|
我做红藻微卫星标记的，先用温度梯度找到合适的退火温度后再进行PCR扩增的，引物来源有EST设计和同科属的不同物种，产物应该在500bp以下才对的哇？我maker用的DL1000的，琼脂糖为1%浓度，100V电泳30min，电泳后发现，PCR扩增出来的产物居然比maker最大分子量还要大，有的是同科属的不同物种的引物，这种情况不止一对引物出现，多对引物都出现，请问到底哪里出问题了？下面是我的PCR程序和体系，谢谢指教！！！ PCR程序：94度 5min 94度50s 退火温度 45s 72度 50s 30个循环 72度 8min PCR体系25ul：Buffer 2.5ul dntp 2ul Mgcl2 1.5ul F 0.8ul R 0.8ul Taq 0.3ul 加水至25ul  同一个科的近缘物种的引物扩增  本物种引物扩增 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有292人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
英语复杂句翻译求助
已经有4人回复- 求助蛋白纯化的高手
已经有5人回复
- 考研调剂求助各位师兄师姐，女生，不知道调到哪个学校比较好
已经有74人回复
- 求助：使用B-methyl CBS 不对称还原酮为醇，CBS使用溶液的还是固体的好？
已经有4人回复
- 【求助】测纯金属电阻率的方法
已经有5人回复
- 求助三段翻译。海洋生物学有关的
已经有1人回复
- 求助翻译几段关于海洋生物学的段落（急）
已经有1人回复
- 氨基酸的平均分子量128是怎么计算出来的？
已经有14人回复
- 求助翻译一段英文句子
已经有2人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 中科院阅读理解B求助
已经有5人回复
- 求助生物学名词解释：degeneracy
已经有3人回复
- 【求助/交流】如何选择DNA maker条带？
已经有15人回复
- 【求助/交流】蛋白Maker的条带问题
已经有3人回复
rommel1941
铁杆木虫 (正式写手)
情定山河
- MolEPI: 4
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 8147.7
- 散金: 269
- 红花: 6
- 帖子: 693
- 在线: 110.8小时
- 虫号: 67197
- 注册: 2005-05-05
- 性别: GG
- 专业: 分子与进化生态学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答问题！ 2012-03-22 18:37:37
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答问题！ 2012-03-22 18:37:37
|
建议继续优化试验条件，非特异扩增很严重，主要从Tm和Mg入手比较好。 我所做的SSR标记确实没出现过这种情况，你可以把比较亮的条带切胶回收，然后测序，看看是什么东东。 作微卫星不要这么长的退火时间和延长时间，一般控制在10-30s就好。我的试验条件是94度 4min；94度30s，退火温度 20s，72度 30s 30个循环；72度 2min。因为微卫星的长度都很小，太长的退火和延伸，可能会带来较强的非特异扩增。希望对你有帮助，祝好。 |
l20065091
2楼2012-03-22 16:47:14
3楼2012-03-22 20:16:02
rommel1941
铁杆木虫 (正式写手)
情定山河
- MolEPI: 4
- 应助: 52 (初中生)
- 金币: 8147.7
- 散金: 269
- 红花: 6
- 帖子: 693
- 在线: 110.8小时
- 虫号: 67197
- 注册: 2005-05-05
- 性别: GG
- 专业: 分子与进化生态学
4楼2012-03-22 22:29:14
5楼2012-03-23 21:04:28
kidluag
金虫 (正式写手)
不自信的师生
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1044.5
- 散金: 45
- 红花: 10
- 帖子: 482
- 在线: 38.1小时
- 虫号: 1633228
- 注册: 2012-02-22
- 性别: MM
- 专业: 蔬菜学与瓜果学
6楼2013-05-26 01:33:04
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2014-06-07 16:42:35
红色和蓝色
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 823.9
- 散金: 51
- 帖子: 59
- 在线: 42.9小时
- 虫号: 3383656
- 注册: 2014-08-26
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
8楼2019-07-31 19:19:00