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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白诱导不能表达！
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白诱导不能表达！

我构建的pet-28a重组载体，测序后序列正确，但是我叫IPTG诱导12小时。20度后却没有发现目的大小的条带，请问这是什么原因？
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1楼 2012-03-20 19:32:03
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-03-20 20:22:11:
温度是不是太低？菌长了吗？IPTG浓度多少？

菌体长的还是挺多的，IPTG浓度为1mM。
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3楼2012-03-20 20:43:05
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
温度是不是太低？菌长了吗？IPTG浓度多少？
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viki_MDK
jiayoubashaonian
2楼2012-03-20 20:22:11
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xiangyunch

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是目标基因片段过大，导致表达量改变较小？还有可以设下时间梯度试试
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4楼2012-03-21 09:23:43
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good! 2012-03-21 18:55:33
viki_MDK: 金币+5 2012-05-25 18:43:11
1 每种蛋白最佳表达的温度不一样的，有的低至15度左右，有的需要30度左右，你可以做下温度梯度看看。
2 处理过程中没有让蛋白降解吧？否则在预期大小处也可能看不到条带。
3 IPTG一般是在菌体OD值达到0.6-1 左右的时候加入。
4 你的宿主菌是适合目的蛋白表达的吗？
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5楼2012-03-21 10:12:58
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